Implication du complexe Nup107-160 des Pores Nucléaires dans l’Entrée, la Progression et la Sortie de Mitose

par Michela Zuccolo

Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Biologie cellulaire

Sous la direction de Valérie Doye.

Soutenue en 2008

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des Sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .


  • Résumé

    Au cours de ma thèse je me suis intéressée à comprendre les fonctions mitotique d’un composant structural des pores nucléaires, le complexe Nup107-160. Pendant la première partie de mon travail, je me suis concentrée sur la localisation aux kinétochores du complexe Nup107-160. Ainsi, j’ai montré qu’il existe au moins deux sites d’ancrage pour ce complexe aux kinétochores : le premier est constitué par le complexe Ndc80 et le deuxième par la protéine CENP-F. De plus, j’ai confirmé le rôle de la sous-unité Seh1 dans le recrutement de tout le complexe Nup107-160 aux kinétochores. Les cellules déplétées pour Seh1 sont retardées en mitose à cause de l’activation du point de contrôle mitotique. De plus, ces cellules présentent des fuseaux plus allongés, une plus faible distance inter-kinétochore et des interactions kinétochores/microtubules moins stables. Dans la deuxième partie de ma thèse, j’ai cherché à comprendre le rôle fonctionnel de l’interaction entre Nup133 et CENP-F. Des analyses de mutants de délétion ont montré que le domaine de Nup133 qui interagit avec CENP-F est requis pour recruter cette protéine à l’EN en prophase. Nous avons ensuite identifié un nouveau réseau moléculaire qui permet à la dynéine de se localiser à la périphérie nucléaire – via les NPC – à la transition G2/M. J’ai ainsi pu démontrer un rôle nouveau et inattendu pour les NPC – et plus particulièrement pour le complexe Nup107-160 – dans l’ancrage des centrosomes au noyau en prophase, avant la rupture de l’enveloppe nucléaire. La connexion centrosome/noyau est importante pour faciliter l’assemblage et le positionnement du fuseau mitotique, ce qui aide à une division cellulaire efficace et sans fautes. Dans son ensemble, ma thèse a mis en évidence de nouvelles fonctions mitotiques pour un composant structurale des NPC, le complexe Nup107-160, et elle a élucidé des liens physiques et/ou fonctionnels entre ce complexe et d’autres protéines qui présentent également une double localisation aux NPC et aux kinétochores.

  • Titre traduit

    Involvement of the Nup107-160 nuclear pore subcomplex in entry, progression and exit from mitosis


  • Résumé

    During my PhD I tried to elucidate the mitotic functions of a structural component of the nuclear pore complexes, the Nup107-160 complex, in mammalian cells. In the first part of my work I focused on the kinetochore localization of the Nup107-160 complex. I was able to show that at least two determinants are required to ensure the proper targeting of this complex to kinetochores: the Ndc80 complex and CENP-F, which directly interacts with the Nup133 subunit of the Nup107-160 complex. Moreover, I confirmed the role of the Seh1 member of the complex in mediating the kinetochore localization of the whole complex. Seh1 depleted cells, which can assemble functional nuclear pores but fail to accumulate the Nup107-160 complex to kinetochores, were delayed in mitosis in a checkpoint-dependent manner and showed increased spindle length, decreased inter-kinetochore distance and fewer cold-stable k-fibres. In the second part of my thesis I investigated the functional role of the interaction between Nup133 and CENP-F. Deletion analysis allowed us to map the CENP-F interacting domain in the N-terminal region of Nup133, which constituted the anchoring site of CENP-F at the nuclear periphery at the G2/M transition. RNA interference experiments and the use of dominant negatives constructs unravelled a molecular network that mediates the localization of dynein at the NE in prophase via NPCs. I could demonstrate a completely novel and unexpected role for NPCs – and more specifically for the Nup107-160 complex – in tethering centrosomes to the nucleus in prophase, before nuclear envelope breakdown. The NPC-centrosome association plays an active role in facilitating spindle assembly and positioning, a process that helps an efficient and faithful mitotic progression. Altogether my thesis unravelled novel mitotic functions for a building block of NPCs, the Nup107-160 complex, and it evidenced functional and physical links between this complex and other proteins sharing a dual localization at NPCs and kinetochores.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (212 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 187-212

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(2008)79
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