Etude immunophénotypique et fonctionnelle de sous-populations lymphocytaires T humaines au cours de leur manipulations ex vivo

par Maude Guillot

Thèse de doctorat en Biologie des cellules sanguines

Sous la direction de François Lemoine.

Soutenue en 2008

à Paris 7 .


  • Résumé

    Le développement d'approches de thérapie cellulaire et génique utilisant les lymphocytes T humains nécessite que ceux-ci conservent leurs propriétés fonctionnelles après manipulation ex vivo. Toutefois, plusieurs études ont montré l'apparition après culture d'altérations de leurs fonctions. Nous avons tout d'abord cherché à comprendre l'influence des lymphocytes T régulateurs CD4+CD25high (LyTreg) sur la fonctionnalité des lymphocytes T effecteurs conventionnels. Nos résultats ont montré un déséquilibre entre lymphocytes T effecteurs et LyTreg, en faveur de ces derniers, au cours des cultures de lymphocytes T murins et humains. De plus, nous avons observé une augmentation de la fréquence de lymphocytes T humains exprimant le marqueur de surface CD90 (Thy-1) au cours des cultures. La caractérisation des lymphocytes T CD90+ a révélé que cette sous-population cellulaire possède un phénotype proinflammatoire proche de celui des lymphocytes Th17 et que CD90 n'est pas exprimé par les LyTreg naturels, même après activation. Par ailleurs, les LyTreg, connus pour jouer un rôle essentiel dans le contrôle des réponses immunes normales et pathologiques, pourraient avoir un intérêt thérapeutique majeur. C'est pourquoi nous avons étudié différentes conditions de culture, en respect des bonnes pratiques de fabrication, en vue de produire des LyTreg fonctionnels pour des applications de thérapies cellulaires. Afin de renforcer la sécurité du produit cellulaire et de pouvoir notamment contrôler une prolifération anormale des LyTreg après injection aux patients, ceux-ci ont été transduits par le gène « thymidine kinase », utilisé comme gène de sécurité.

  • Titre traduit

    Immunophenotypic and functional study of human lymphocyte subsets during their ex vivo manipulation


  • Résumé

    Development of cell/gene therapy strategies using human T cells requires that these cells maintain the functional activity after ex vivo manipulation. However, further studies have provided evidence of functional alterations after culture. First, we studied the role of CD4+CD25high natural regulatory T cells (nTreg) on the functionnality of effector T cells. Our results underline a disturbance of the balance between effector and nTreg with a preferential expansion of nTreg during human and mouse T-cell cultures. Furthermore, we observed an increased frequency of human T cells expressing thé CD90 cell surface marker (Thy-1) during culture. The characterization of CD90+ T cells revealed that this cell subset has a pro-inflammatory phenotype similar to Th17 cells and that CD90 is not expressed by nTreg, even after activation. NTreg, known to play a key role in the control of normal and pathologic immune responses, could have a great therapeutic potential. For these reasons, we tested different culture conditions, in respect with Good Manufacturing Practices (GMP), to expand functional nTreg for T-cell therapy use. In order to ensure the safety of the cell product and to control anormal expansion of nTreg after injection into patients, nTreg were transduced with the « thymidine kinase » suicide gene, used as a safety gene.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (246 f.)
  • Notes : Thèse confidentielle
  • Annexes : 492 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TS (2008) 239
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