Vers une réplication controlée des vecteurs dérivés de l'adénovirus canin de type 2

par Marion Szelechowski

Thèse de doctorat en Microbiologie. Virologie fondamentale

Sous la direction de Marc Eloit.

Soutenue en 2008

à Paris 7 .


  • Résumé

    Parmi les vecteurs viraux développés pour la vaccination, les vecteurs dérivés des adénovirus se sont avéré prometteurs. Des vecteurs réplicatifs et défectifs d'un sérotype canin d'adénovirus, Cav2, ont été dérivés et nous avons pu démontrer leur efficacité à mettre en place une immunité protectrice contre le produit du transgène chez la souris puis chez le mouton. L'objectif de ce travail de thèse est de proposer une alternative à l'utilisation de ces deux types courants de vecteurs en vaccination, avec le développement de vecteurs semi-réplicatifs dérivés de Cav2. Ces vecteurs doivent permettre la réplication du génome viral sans production de nouvelles particules infectieuses, et posséder ainsi à la fois les caractéristiques d'efficacité des vecteurs réplicatifs et de sécurité des vecteurs défectifs. Ces propriétés peuvent être obtenues par la délétion sur le génome viral de séquences codant des protéines tardives de Cav2 indispensables à la formation de particules infectieuses mais non nécessaires à la réplication du génome viral. Afin d'être en mesure de manipuler précisément le génome viral, nous avons réalisé une cartographie complète de l'unité de transcription tardive de Cav2. Nous avons ensuite réalisé des délétions totales ou partielles des cadres de lecture correspondant à nos cibles, ou inséré des mutations non-sens, par recombinaison homologue sur le génome sauvage. Pour la production des vecteurs, nous avons dû construire des lignées cellulaires de complémentation, apportant en trans les protéines cibles respectives. Enfin, nous avons pu vérifier in vitro les caractéristiques semi-réplicatives de vecteurs Cav2 délétés de la fonction protéase.

  • Titre traduit

    Towards semi replicative vectors derived from canine adenovirus type 2


  • Résumé

    Among the vectors derived for vaccination purpose, those derived from adenoviruses revealed particularly hopeful results. Replicative and defective vectors have been developed from Cav2, and we were able to demonstrate their to settle a protective immune response against the transgene product both in mice and sheep. This work aims to propose an alternative vector for vaccination derived from Cav2 and characterized by an abortive or semi-replicative behavior in the transduced cells. This vector should enable the genomic replication without production of new infectious particles. It should therefore possess both replicative vectors efficacy and defective vectors security. This can be achieved by the deletion of defined viral genomic regions, in particular within the late expression region which is dispensable for the first stages of the replication cycle. To manipulate accurately the viral genome, we elaborated a transcriptional map of the late transcriptional unit of Cav2 génome. Deletion of ail or part of the targeted open reading frames were then realized, or nor sens mutation were introduced within them, by homologuous recombinaison on the wild type Cav2 genome. Then we constructed complementing cell lines expressing the viral deleted proteins, in order to produce the recombinant viral particles. Finally, the semi-replicative properties of protease deleted Cav2 were confirmed by in vitro analysis.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (292 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 430 réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2008) 186
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 10357
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