Propriétés structurales et fonctionnelles des protéines RhBG et RhCG, transporteur d'ammonium chez les mammifères

par Nedjma Zidi-Yahiaoui

Thèse de doctorat en Génomes et protéines

Sous la direction de Yves Colin.

Soutenue en 2008

à Paris 7 .


  • Résumé

    Les protéines Rhésus des mammifères appartiennent à la superfamille Amt/Mep/Rh des transporteurs d'ammonium identifiés chez les bactéries, les levures, les plantes et les animaux. Alors que RhCE, RhD et RhAG sont spécifiquement érythroïdes, les protéines RhBG et RhCG sont exprimées dans divers organes impliqués dans le métabolisme et le transport de l'ammonium. Nous avons étudié les propriétés fonctionnelles des transporteurs RhBG et RhCG humains exprimés dans les cellules HEK293 et MDCK. La fonction de transport d'ammonium dans les cellules transfectées et sauvages a été analysée par le suivi des variations du pH intracellulaire en présence d'un gradient d'ammonium. Cette étude a été réalisée par spectrofluorimétrie en flux interrompu en utilisant une sonde fluorescente sensible au pH. Nous avons observé une alcalinisation très rapide et une énergie d'activation plus faible des cellules transfectées comparées aux cellules sauvages. Nos résultats montrent que les protéines RhBG et RhCG facilitent les mouvements de NH₃ à travers la membrane plasmique des cellules et apparaissent ainsi comme des canaux à NH₃. Sur la base de la structure 3D des canaux à NH3 bactériens, l'AmtB d'Escherichia coli et la Rh50 de Nitrosomonas europaea, et d'une modélisation par homologie des protéines Rh humaines selon la méthode HCA, nous avons identifié les différents acides aminés critiques pour la fonction du canal RhCG et comparé les mécanismes de transport d'ammonium des canaux Rh et de l'EcAmtB. Cette étude a permis de mettre en évidence des similitudes et des différences dans le mécanisme de transport d'ammonium via les transporteurs de la famille Amt et les protéines Rh.

  • Titre traduit

    Characterization of the different Fc Gamma receptor isoforms expressed by human nk cells for a better functional optimisation of therapeutic monoclonal antibodies


  • Résumé

    The mammalian Rh (Rhesus) proteins (RhCE, RhD, RhAG, RhBG and RhCG) belong to the Amt/Mep/Rh superfamily of ammonium transportera identified in bacteria, yeasts, plants and animals. Whereas RhCE, RhD and RhAG are erythroid specific, RhBG and RhCG are expressed in key organs associated with ammonium transport and metabolism particularly in kidney and liver. We have investigated the ammonium transport function of human RhBG and RhCG by comparing intracellular pH variation in wild type and transfected MDCK and HEK293 cells in the presence of an ammonium (NH₄⁺/NH₃) gradient. Stopped-flow spectrofluorimetry analysis, using a pH-sensitive probe, revealed, as compared with wild type cells, a low temperature-dependence of ammonium transport and a faster alkalinisation phase in RhBG and RhCG-transfected cells. Our results show that NH₃ movement across the plasma membrane is facilitated by RhBG and RhCG indicating that these proteins behave as NH₃ channels. Homology models based on crystallographic structures o the bacterial NH₃ channels Escherichia coli AmtB (EcAmtB) and Nitrosomonas europaea Rh5( (A/eRh50) confirms a channel structure for human Rh glycoproteins. Based on the 3D structure, we have highlighted critical residues involved in Rh channel activity and specific mechanistics of NH transport as compared to EcAmtB. This study reveals similarities and differences in ammonia transport mechanism through EcAmtB and human Rh proteins. These functional specificities might be related to the different physiological nitrogen roles in bacteria and mammals.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (269 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 165 réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2008) 133
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.