Nouvelles approches thérapeutiques dans la glycogénose de type 2

par Gaëlle Douillard-Guilloux

Thèse de doctorat en Thérapeutiques biotechnologiques

Sous la direction de Catherine Caillaud .

Soutenue en 2008

à Paris 7 .


  • Résumé

    La glycogénose de type II est une maladie liée au déficit en alpha-glucosidase acide. Elle est caractérisée par une accumulation intra-lysosomale de glycogène dans le muscle squelettique, Notre travail a été de développer de nouvelles approches thérapeutiques pour cette pathologie. Nous avons tout d'abord tenté de moduler la synthèse du glycogène (thérapie par inhibtion de substrat) en inhibant les enzymes clés de sa biosynthèse : la glycogénine (GYG) et la glycogène synthase (GYS), à l'aide de shRNA. Un vecteur viral AAV contenant le shARN-GYS2 a été construit et injecté par voie intramusculaire chez des souris GAA-/- et a permis de réduire l'accumulation du glycogène. Afin de confirmer, une approche par knock-out a été développée. Les souris GAA-/- ont été croisées avec des souris mutées pour la GYS musculaire. Ces souris double KO ne présentent pas d'accumulation de glycogène et leur capacité a exercer une activité musculaire est nettement améliorée par rapport aux souris GAA-/-. Par ailleurs, nous avons également testé la possibilité de développer une immunotolérance vis à vis de l'enzyme recombinante par induction d'un chimérisme après greffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH). Nous avons montré le développement d'une tolérance à l'enzymothérapie avec absence totale de production d'anticorps anti-GAA chez les souris ayant reçu les CSH-GAA. En parallèle, afin d'essayer de contre-balancer la production massive d'anticorps anti-GAA, une augmentation de l'expression et de la sécrétion de la GAA a été obtenue sur les cellules musculaires de patients transduites par un vecteur lentiviral contenant le gène de la GAA sous le contrôle d'un promoteur muscle-spécifique fort.

  • Titre traduit

    Novel therapeutic approach for Glycogene Storage Disorder type 2


  • Résumé

    Glycogen storage disease type II is caused by defects in the lysosomal acid alpha-glucosidase (GAA) gene. This pathology is characterized by glycogen accumulation, especially in muscles. Enzyme Replacement Therapy efficiency is restricted. Therefore, our aim is to develop a novel therapeutical approach for this pathology. Small interfering RNAs (siRNAs) targeted to the two major genes for glycogen synthesis (glycogenin and glycogen synthase) were designed to explore the possibility of silencing these two genes. A viral vector AAV with the shARN-GYS2 was injected in the muscle of GAA-/- mice and reduced the glycogen accumulation. In the same time, an approach by knock-out was developped. Mice GAA-/- were crossed with mice KO for the muscular form of GYS. These double KO mice do not present accumulation of glycogen and their muscular activity is clearly improved compared to GAA-/- mice. We also tested the possibility to induce a immunotolerance against the recombinante enzyme by using bone marrow transplantation. The development of tolerance to the recombinante enzyme induce no more production of anti-GAA antibody in the mice having received the CSH-GAA. In parallel, to decrease the massive destruction of the recombinante enzyme by the anti-GAA antibody, An over-expression of the GAA was obtained on the muscular cells of patients transduites by a vector lentiviral containing gene of the GAA under the control of a strong muscle-specific promotor.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (258 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 414 Réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2008) 119
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 10054
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.