Recherche Avancée

Thèse soutenue

Imagerie par désorption laser/spectrométrie de masse de multiples marqueurs spécifiques : développement de la technique TAMSIM ''Targeted Multiplex Mass Spectrometry Imaging''

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Auteur / Autrice : Gwendoline Thiery
Direction : Jean-Claude Tabet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Systèmes bio-organiques. Spectrochimie
Date : Soutenance en 2008
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

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La protéomique est devenue un domaine de recherche essentiel en biologie et en médecine. Afin, de répondre aux enjeux de cette discipline, il est nécessaire de pouvoir caractériser et localiser les protéines exprimées au niveau cellulaire. De nombreuses techniques d’analyses in situ des ces protéines considérées comme étant des marqueurs spécifiques d’une pathologie existent et sont utilisées en routine, notamment pour le suivi des cancers, dans de nombreux laboratoires d’anatomo pathologie. La plus répandue est l’immunohistochimie (IHC). Cette technique consiste à révéler spécifiquement in situ un complexe immun (antigène-anticorps). Dans l’optique d’accroître la capacité de détection multiple (multiplexage) d’une immunoréaction, nous avons développé une nouvelle technique d’imagerie in situ de multiples marqueurs spécifiques. Des traceurs chimiques photoclivables (Tag) sont fixés spécifiquement sur des anticorps. Les anticorps marqués sont complexés in situ aux protéines cibles présentent sur le tissu. Les Tag sont ensuite clivés de leurs anticorps respectifs par désorption laser. Apres une irradiation de la coupe par le laser à 355 nm une image est générée à partir des différents spectres de masse enregistrés pour chaque Tag utilisés. Contrairement au mode MALDI, l’utilisation de la matrice n’est pas nécessaire pour favoriser l’ionisation de ces composés chimiques. Ce qui simplifie grandement l’analyse par spectrométrie de masse. Cette technique appelée TAMSIM pour TArgeted multiplex Mass Spectrometry IMaging a pu être validée pour l’analyse de différents marqueurs spécifiques localisés au sein des tissus pancréatiques et sur des sections tissulaires de foie humain.