Mise au point d'un modèle ex-vivo d'étude de l'immunité innée des anticorps naturels lors de l'ischémie-reperfusion rénale

par Marc Gigante

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Roger Rahmani.


  • Résumé

    The participation of innate immunity mediated by natural autoreactive an polyreactive IgM antibodies is shown in recent developpements of ischemia reperfusion injury. The purpose of this thesis was to settle an ex-vivo model to confirm this theory. Lymphoblastic cells lines (LCLs) were established with infection by Eptein-Barr Virus (EBV) associated with unmethylated single-stranded DNA motifs (CpG oligonucleotides) as an antigenic stimulus. For each subtype of B Cell (Transitional, Mature naive and Memory), the effect of immortalization on phenotypic markers was studied in flowcytometry. The production of immunoglobulin was estimated by ELISA as well as the Polyreactivity of these antibodies. Autoreactivity was appreciating by an ana HEP-2 test. On the other hand, an ex-vivo normothermic reperfusion device was built using a modified (oxygenation an temperature control) perfusion pulsatile machine (MOX 100 or RM3). All 4 subtypes of B-cells from human peripheral blood were transformed into actively proliferating lymphoblastoid cell lines. He effect of transformation were relevant for 8 out of 16 studied phenotype markers: CD5, CD10, CD23, CD24, CD27, CD38, IgD, IgM. Immunoglobulin secretion : IgM, IgA or IgG can be secreted, but no IgD. The type of Ig secreted differs according to the original subtype of B-Cell. There is a very strong and coherent link between Ig membrane expression and Ig secretion. Some LCLs were secreting IgM type autoreactive antibodies. Ther were no IgA or IgG type autreactive antibodies. Some LCLs were secreting IgM type polyreactive antibodies. We succeed in building a ex-vivo normothermic reperfusion kidney device with an active diuresis of 6 hours. We succeed in building a ex-vivo normothermic reperfusion kidney device with an active diuresis of 6 hours in order to study Innate immunity mediated by Natural IgM during ischemia reperfusion injury. Mass production of autoreactive an polyreactive antibodies for this model is possible.

  • Titre traduit

    Innate immunity mediated by natural IgM during ischemia reperfusion injury : an ex-vivo model


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Mise au point d’un modèle ex-vivo d’étude de l’immunité innée des anticorps naturels lors de l’ischémie reperfusion rénale. Les développements récents des études sur le syndrome d’ischémie-reperfusion tendent à mettre en évidence le rôle de l’immunité innée avec une participation d’anticorps naturels autoréactifs et polyréactifs de type IgM. Afin d’étayer cette hypothèse il nous fallait mettre au point un modèle associant un système ex vivo d’ischémie perfusion normothermique d’une part et d’un moyen de production d’anticorps de type IgM autoréactifs et polyréactifs. Les lignées cellulaires lymphoblastiques B (LCLs) obtenues par transformation par le virus d’Epstein-Barr (EBV) sont largement utilisées en pratique courante. En utilisant l’infection par virus EBV associée à une stimulation du Toll like receptor 9 (TLR9), le but de ce travail était d’établir des lignées cellulaires lymphoblastiques B issues de différentes sous population lymphocytaire B sanguines (lymphocytes B transitionnels, lymphocytes B naïfs, lymphocytes B mémoires) et d’étudier l’effet de cette transformation sur l’expression des marqueurs phénotypiques ainsi que sur la capacité de production d’immunoglobulines, et ce, pour chacune des sous-populations étudiées. Après sélection des différentes sous-populations, chacune était immortalisée. L’expression des marqueurs phénotypiques des LCLs obtenues (12 marqueurs CD et 4 Ig membranaires) était étudiée. Par une méthode ELISA, la présence d’Ig dans le surnageant était mesurée et leur poly-réactivité était estimée. Le caractère autoréactif de ces anticorps était apprécié par un test ana HEP-2. Parallèlement, un système de perfusion de rénal normothermique était construit à partir d’une machine à perfusion pulsatile modifiée (MOX100 ou RM3), notamment pour ses variables d’oxygénation et de contrôle de température. Obtention de lignées lymphoblastiques produisant des anticorps autoréactifs semblables aux anticorps IgM naturels : Les quatre sous-populations lymphocytaires B peuvent être immortalisées par le virus EBV associé au Cpg. Ce résultat n’avait jamais été rapporté. Parmi tous les marqueurs phénotypiques étudiés, les effets de l’immortalisation sont pertinents pour 8 d’entre eux : CD5, CD10, CD23, CD24, CD27, CD38, IgD, IgM. Concernant la sécrétion d’immunoglobuline : Des IgM, IgA ou IgG peuvent être secrété mais pas des IgD. Les classes d’immunoglobulines sécrétées diffèrent selon la sous-population lymphocytaire B à l’origine de la transformation. Il existe une forte corrélation entre l’expression des Ig membranaires et la sécrétion d’immunoglobulines. Certaines LCL secrètent des anticorps autoréactifs de type IgM ; il n’a pas été mis en évidence d’autoanticorps de type IgA ou IgG. Certaines LCL secrètent des anticorps poly-réactifs de type IgM. Les résultats obtenus concernant les caractères phénotypiques. Les tentatives d’immortalisation de la sous-population lymphocytaire B1 furent un échec. Le système de perfusion rénal normothermique, utilisant des reins porcins entiers permettait d’obtenir une diurèse efficace pendant 6 heures avec un pic à la deuxième heure de 140ml/h.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (78 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 75-78. Résumé en français

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Nice Sophia Antipolis. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : 08NICE4076
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.