Etude des greffages non-covalents de capillaires pour l'analyse des peptides et des protéines en électrophorèse capillaire

par Reine Nehme

Thèse de doctorat en Sciences Chimiques et Biologiques pour la Santé. Sciences Physico-Chimiques et Ingénierie appliquée à la Santé

Sous la direction de Huguette Fabre.


  • Résumé

    L'électrophorèse capillaire (EC) est une méthode de choix pour la séparation des biomolécules. Cependant, un défit majeur pour l'analyse des biomolécules en EC, en particulier des peptides et protéines, est d'éliminer les phénomènes d'adsorption sur les parois des capillaires en silice. L'utilisation de greffages non-covalents avec des polyélectrolytes hautement chargés est une solution efficace, simple et rapide. Si des résultats très encourageants ont été obtenus, aucune étude décrit l'influence des conditions de greffage sur la performance des séparations. Le présent travail de thèse peut se diviser en deux volets. Le premier consiste en une étude fondamentale de l'influence de diverses conditions sur la stabilité de recouvrements non-covalents de capillaires avec une ou plusieurs couches de polyélectrolytes et sur leur efficacité à limiter l'adsorption de peptides et protéines modèles en vue de déterminer les conditions optimales de greffage. La nature et la concentration des polyélectrolytes, la force ionique de la solution de greffage ainsi que les procédures de recouvrement, de stabilisation et de conservation des capillaires greffés sont parmi les plus importantes conditions étudiées. La stabilité des recouvrements ainsi développés vis-à-vis de différentes conditions extrêmes (pH, solvants organiques. . . ) a également été analysée. Le deuxième volet consiste en une application des résultats de l'étude fondamentale précédente pour l'analyse de protéines et peptides d'intérêt biologique. Ainsi, les protocoles de recouvrements développés ont été employés pour l'analyse de l'hémoglobine (Hb) dans le sang total d'un patient diabétique. Le dosage de la forme glycquée de l'Hb permet le dépistage de la maladie ainsi que l'évaluation de l'efficacité des traitements chez les patients. D'autre part, les résultats obtenus suite à l'étude fondamentale ont été utilisés pour le développement d'une méthode d'analyse par EC pour le contrôle isomérique d'un puissant sécrétagogue de l'hormone de croissance (GH) et qui est actuellement en essai clinique de phase III. Des résultats inattendus ont été obtenus et la performance de la séparation est comparée à celle obtenue avec des capillaires en silice vierge et de capillaires recouverts d'un polymère neutre (le polyéthylène oxyde ou PEO).

  • Titre traduit

    Study of the graftings not-covalents of capillaries for the analysis of peptides and proteines electrophorese capillary


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Informations

  • Détails : 1 vol. (160 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliographie. f. 62-65

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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire. Section Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TP 2008.MON-19
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