Caractérisation des protéines secrétées par Rhodococcus equi et évaluation de leur pouvoir immunogène en vue de la mise au point d'un vaccin chez le poulain

par Corinne Barbey

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Axel Hartke.

Soutenue en 2008

à Caen .


  • Résumé

    Rhodococcus equi, pathogène ubiquiste intracellulaire facultatif, est l’agent de la rhodococcose équine, première cause de mortalité chez les poulains de un à six mois. Un vaccin expérimental développé par l’Afssa site de Dozulé, à base de protéines membranaires de R. Equi, protège les poulains durant leurs premiers jours de vie (au moins 45 jours), par transfert passif d’anticorps maternels anti-R. Equi. Une protection couvrant toute la période de sensibilité jusqu’à l’âge de six mois nécessite donc le développement d’un vaccin relais à administrer au poulain, dont la fraction antigénique a été sélectionnée parmi les protéines sécrétées par R. Equi. L’analyse de ces protéines par gels SDS PAGE et spectrométrie de masse a abouti à l’identification de 48 protéines dans le sécrétome de R. Equi ATCC 33701. Sur la base d’études bibliographique et immunologique à l’aide de sérums de poulains morts de rhodococcose, 19 protéines ont été sélectionnées et surexprimées. La caractérisation du pouvoir immunogène des 19 protéines recombinantes par Western blot a permis de réduire le nombre de candidats à neuf. La sélection finale des candidats pour la mise au point du vaccin, basée sur leur propriété immunoprotectrice chez la souris nécessite la mise au point des conditions d’infection et d’immunisation qui ont été établies au cours de ce travail. Cette optimisation nous a permis i) d’obtenir les sérums de souris immunisées utilisées pour la sélection des 9 protéines parmi les 19 et ii) de démontrer l’importance d’un adjuvant dans la polarisation de la réponse vers la voie cellulaire protectrice. Il reste néanmoins à définir le meilleur adjuvant à employer chez le poulain.

  • Titre traduit

    Characterization of secreted proteins from Rhodococcus equi as new potential candidates for the development of a vaccine in foals


  • Résumé

    Rhodococcus equi is an ubiquitous facultative intracellular pathogen responsible for equine rhodococcosis, the major cause of mortality in foals between one to six months of age. A previously developed vaccine, composed with R. Equi membrane proteins and delivered in mares, protects foals through passive transfer of immune maternal antibodies during at least 45 days of age. Thus, a protection during the whole length of the risk phase of six months of age requires an active vaccination. In order to develop such a vaccine, secreted proteins of R. Equi were studied. Analysis of these proteins by SDS PAGE and mass spectrometry led to the identification of 48 proteins in the secretome of the ATCC 33701 strain. Based on data from the literature as well as from results obtained with sera from rhodococcosis died foals, 19 proteins were finally selected and overexpressed in E. Coli. This number of candidates was reduced to nine proteins after immunological characterization of each recombinant protein by Western blot. The final candidate selection based on immunoprotective character in mice needs the optimization of infection and immunization conditions which were defined in this work. This last study allowed us i) to obtain sera of immunized mice used to select the nine candidates and ii) to demonstrate the essential role of adjuvant to potentiate an immunoprotective cellular response. Nevertheless, the adjuvant for the vaccine in foals remains to be defined.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (232 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 212-232

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Caen Normandie. Bibliothèque universitaire Sciences - STAPS.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TCAS-2008-74
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.