Anomalies du développement embryonnaire : apport au diagnostic du syndrome de Rubinstein-Taybi et recherche d'un gène impliqué dans une nouvelle forme de chrondrodrysplasie liée à l'X

par Delphine Simon

Thèse de doctorat en Sciences, technologie, santé. Génétique

Sous la direction de Benoît Arveiler.

Soutenue en 2008

à Bordeaux 2 .


  • Résumé

    Notre travail s'inscrit dans l'étude des maladies polymalformatives d'origine génétique. Nous avons dans ce cadre développé deux axes de recherche : - dans le syndrome de Rubinstein-Taybi, nous avons mis en place, pour l'analyse du gène CREBBP, une technique de recherche des réarrangements, la QMF-PCR : nous avons identifié 17 délétions et 1 duplication sur un total de 83 patients, soit un taux de 20 % d'anomalies de dosage génique. Cette technique, hautement résolutive, est aujourd'hui transférée pour le diagnostic hospitalier de cette maladie. Grâce au séquençage des points de cassure, nous avons montré la prédominance du mécanisme NHEJ dans l'apparition des délétions. - nous avons également travaillé sur une famille avec une chondrodysplasie liée à l'X, afin d'identifier le gène impliqué. Le séquençage du gène HDAC6 a mis en évidence une variation dans sa région 3' non traduite. Une approche in silico a établi que cette mutation affecte le site de reconnaissance du miR-433, qui intervient dans la régulation post-transcriptionnelle. Des tests fonctionnels ont montré que la mutation suffit à abroger totalement l'action régulatrice du miRNA, entraînant la surexpression de la protéine HDAC6. Nous avons montré qe le miR-433 déstabilise l'ARNm et provoque sa dégradation. L'analyse par Western Blot a confirmé la surexpression d'HDAC6 dans le thymus d'un foetus mâle atteint, s'accompagnant de la diminution de la quantité de tubuline acétylée, qui est une des cibles d'HDAC6. Notre étude montre que cette mutation d'HDAC6 est très vraisemblablement la cause de cette nouvelle forme de chondrodysplasie.

  • Titre traduit

    Abnormalities of embryonic development : contribution to the diagnosis of Rubinstein-Taybi syndrome and search for a gene involved in a new form of dominant X-linked chondrodysplasia


  • Résumé

    Our work concerns the study of polymalformative diseases of genetic origin. We have developped two research themes : - in patients with the Rubinstein-Taybi patients, we have searched for genetic rearrangements of the CREBBP gene by QMF-PCR. We have identified 17 deletions and 1 duplication in a total of 83 patients analysed, representing 20 % of the cases. This high resolution technique is now under current use in the hospital for diagnostic purposes. Sequencing of the deletion and duplication breakpoints showed that the NHEJ repair mechanism was responsible for the occurence of the rearrangements in the vast majority of cases. - in the second part of our work, we searched for the gene involved in a new form of dominant X-linked chondrodysplasia observed in a large family. We identified a nucleotide variant in the 3'UTR of the HDAC6 gene. An in silico analysis established that this variant affects the recognition site for miR-433, that regulates HDAC6 expression at the post-transcriptional level. Functional tests showed that the variant totally abrogates the regulatory action of miR-433, thus leading to the over expression of the HDAC6 protein. We showed that miR-433 destabilizes the mRNA and provokes its degradation. Western blot analysis confirmed the over expression of HDAC6 in the thymus of an affected male foetus, which is accompanied by a decrease in acetylated alpha tubulin, which is a target of HDAC6. Our study demonstrates that this variant of HDAC6 highly likely causes this new form of chondrodysplasia.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (270 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 243-256. Annexes

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  • Bibliothèque : Université de Bordeaux. Direction de la Documentation. Bibliothèque des Sciences du Vivant et de la Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : CMTB 2008-1551
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