Evaluation de deux nouveaux outils pour l'étude d'échantillons biologiques par spectroscopie de résonance magnétique nucléaire

par Delphine Bon

Thèse de doctorat en Chimie. Biologie. Santé

Sous la direction de Franck Desmoulin et de Myriam Martino.

Soutenue en 2007

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    L'amélioration des outils analytiques est aujourd'hui indispensable pour la recherche de nouveaux marqueurs métaboliques, que ce soit pour l'aide au diagnostic de pathologies ou pour le suivi d'effets thérapeutiques. Lorsqu'on désire analyser des tissus par RMN liquide en haute résolution, il est nécessaire de réaliser une extraction tissulaire préalable. A l'opposé, la RMN HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning : RMN haute résolution par rotation de l'échantillon à l'angle magique) permet l'analyse directe des tissus biologiques, qu'ils soient d'origine animale ou végétale. La première partie de notre travail présente les différentes études que nous avons réalisées illustrant l'intérêt et les limites de cette nouvelle méthode. L'évaluation critique réalisée à partir d'un large éventail expérimental (animaux vivants (ver endogéique et larve de carabe), tissus rénal, cardiaque et musculaire frais et congelés) révèle ses inconvénients sur les plans logistique, sanitaire et analytique. La RMN HR-MAS permet l'observation simultanée des métabolites hydrosolubles et organosolubles mais leur quantification est souvent difficile. De plus, la rotation rapide du rotor (1-5 kHz) entraîne une altération des échantillons. L'avantage principal de la méthode réside dans sa capacité à analyser des échantillons de faible volume (12-92 µL) avec une excellente sensibilité. Notre étude nous a conduit à privilégier l'analyse RMN sur l'extrait plutôt que sur le tissu intact. La seconde partie concerne la métabonomique par RMN. L'étude métabonomique comparée de cellules de glioblastomes humains de phénotype radiorésistant ou radiosensible a permis de mettre en évidence des marqueurs caractéristiques de la radiorésistance. . .

  • Titre traduit

    Evaluation of two new tools for the analysis of biological samples by nuclear magnetic resonance spectroscopy : HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning) NMR : a technical analysis of crudesamples : Metabonomic : a new statistical method of spectra analysis for research of metabolic signatures


  • Résumé

    The improvement of analytical tools is essential to find new metabolic biomarkers, to help for pathology diagnosis or to follow therapeutic effects. An extraction procedure is needed to analyse tissues by liquid high-resolution NMR. With HR-MAS (High-Resolution Magic Angle Spinning) NMR, a direct analysis of tissues is possible (animal or vegetal tissues). The first part of this work shows the different studies we carried out to evaluate the interests and the limitations of this new method. A critical evaluation, achieved on a large scale of biological samples (live animals (earthworm, ground bettle larvae), fresh and frozen kidney, cardiac and musculary tissues) highlights several drawbacks on logistical, sanitary and analytical points of view. HR-MAS NMR allows the simultaneous observation of hydrosoluble and organosoluble metabolites but their quantification is often difficult. Then rapid rotation of the rotor (1-5 kHz) involves sample alteration. The main advantage of this method resids in its ability to analyse small samples (12-92 µL) with high sensitivity. Our study led us to favor liquid NMR analysis on extract tissues rather than NMR analysis on intact tisssues. The second part concerns metabonomic by NMR. A compararive metabonomic study of human glioblastoma cell lines, radioresistant or radiosensitive, reveals a characteristic biomarker of radioresistance. . .

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Informations

  • Détails : 1 vol. (177 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 161-175

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2007TOU30273
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