Etude de trois transporteurs de monosaccharides impliqués dans le developpement de la baie de raisin (vitis vinefera L. ) : identification, caractérisation, localisation et régulation

par Céline Vignault

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Serge Delrot et de Rémi Lemoine.


  • Résumé

    La Vigne est principalement cultivée pour ses baies de raisin, qui ont un intérêt économique considérable. Afin de mieux comprendre les mécanismes impliqués dans l’accumulation des sucres, nous avons identifié trois transporteurs de monosaccharides : VvHT1 (Vitis vinifera hexose transporter 1), VvHT2 et VvHT6. VvHT1 a été caractérisé dans le système hétérologue levure comme un transporteur de glucose membranaire. En conjuguant des techniques d’hybridation in situ et d’immunolocalisation nous avons pu localiser VvHT1 à l’interface du complexe cellule criblée/cellule compagne. Les tentatives de caractérisation fonctionnelle de VvHT2 et VvHT6 dans la levure ayant échoué, nous avons opté pour de la transgenèse. Ainsi des expériences d’expression transitoire dans les protoplastes de plantes ont permis de localiser VvHT2-GFP et VvHT6-GFP sur le tonoplaste. Afin de caractériser VvHT2 et VvHT6, des mesures d’absorption de sucres radiomarqués réalisées sur des cellules transgéniques de Vigne surexprimant VvHT2 révèlent un efflux de glucose par rapport au contrôle, et celles surexprimant VvHT6 révèlent un influx de glucose plus important comparativement au contrôle. Dans le but de mieux comprendre la régulation de ces transporteurs au cours du développement de la baie, nous avons cloné et analysé leurs promoteurs. Des expériences de RT-PCR semi-quantitative réalisées après traitements de cellules de Vigne par différents stimuli ont révélé que certains des éléments identifiés par analyse in silico sur les promoteurs pourraient être fonctionnels. Enfin, des constructions promoteursVvHT::GUS ont été préparées et utilisées pour localiser l’expression de VvHT2 et VvHT6 in planta.

  • Titre traduit

    Study of three monosaccharide transporters involved in the grape berry development (Vitis vinifera L. ) : identification, characterization, localisation and regulation


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Grapevine is mainly cultivated for its berries, which are of major economical interest. In order to better understand the mechanisms involved in sugar accumulation, we identified three monosaccharide transporters : VvHT1 (Vitis vinifera hexose transporter 1), VvHT2 et VvHT6. VvHT1 have been characterized in heterologous yeast system as a plasma membrane glucose transporter. The combine use of in situ hybridization and immnunogold labelling, allowed us to localize VvHT1 at the sieve element – companion cell interface. As attempts to express VvHT2 and VvHT6 in yeast failed, we decided to use transgenic approach. Thus, transient expression experiments in plant protoplasts allowed us to localize both VvHT2-GFP and VvHT6-GFP at the tonoplast. In order to characterize VvHT2 and VvHT6, sugar uptake experiments were performed on the transgenic cells overexpressing either VvHT2 or VvHT6. The results obtained revealed that the overexpression of VvHT2 resulted in a glucose influx of less importance in comparison to the control and that the overexpression of VvHT6 was responsible of a more important glucose influx compared to the control. In order to better understand the regulation of the expression of these transporters during grape berry development, we cloned and analyzed the corresponding promoters. Semi-quantitative RT-PCR experiments conducted on grape cell suspensions after different treatments suggested that some of elements identify on these promoters by in silico analysis could be functional. Finally, promoterVvHT::GUS constructs were produced and allowed the localisation of VvHT2 and VvHT6 expression in planta.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (153-[36] p.)
  • Annexes : Bibliogr. [354] réf.

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  • Bibliothèque : Université de Poitiers. Service commun de la documentation. Section Sciences, Techniques et Sport.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 07/POIT/2331-B
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