La micro chromatographie liquide à haute température pour l'analyse rapide et hautement discriminante des lipides d'intérêt biologique

par Aurélie Hazotte

Thèse de doctorat en Pharmacie

Sous la direction de Pierre Chaminade.


  • Résumé

    La complexité structurale des lipides et leur absence de chromophores rendent difficiles leur séparation et leur détection en chromatographie liquide. L’objectif de cette thèse est le développement d’une technique d’analyse qui soit à la fois discriminante, sensible, rapide et efficace. La micro chromatographie liquide à haute température (µHTLC) couplée à un détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) adapté aux micros débits, a été mise en place sur carbone graphite poreux (PGC). Une étude cinétique a mis en évidence le réel gain d’efficacité obtenu en µHTLC à des températures d’analyses et des débits élevés. Cette technique permet de diminuer fortement les temps d’analyses et d’améliorer la forme des pics d’élution. Une échelle de force éluante a été établie en se basant sur l’étude de la sélectivité méthylène sur PGC : l’augmentation de la température modifie la force éluante des solvants organiques, permettant ainsi l’utilisation de solvants alcools, moins toxiques que ceux classiquement utilisés dans l’analyse des lipides. Une application a été réalisée sur des mélanges lipidiques complexes pour illustrer le potentiel de la µHTLC et du PGC dans la séparation de ces espèces moléculaires. D’autre part, la µHTLC a été couplée au DEDL, à la spectrométrie de masse et au détecteur à aérosol chargé (CAD), afin de positionner ce dernier en terme de performances par rapport aux deux autres et d’étudier les effets de la µHTLC sur la réponse des détecteurs. Enfin, concernant la modulation de la sélectivité par la température, une étude a été réalisée sur l’analyse des triglycérides en mode isotherme et gradient de température.

  • Titre traduit

    Micro high-temperature-liquid-chromatography for fast and highly discriminating analysis of biological relevant lipids


  • Résumé

    The structural complexity of lipids and their lack of chromophores make their separation and their detection difficult in liquid chromatography. The aim of this thesis is the development of an analysis technique which is at the same time discriminating, sensitive, fast and efficient. The micro high-temperature liquid chromatography (µHTLC) coupled with an evaporative light scattering detector (ELSD) adapted to micro flow rates, was implemented on porous graphitized carbon (PGC). A kinetic study has highlighted the real enhancement of efficiency obtained in µHTLC at elevated temperatures and flow rates. This technique allows to strongly decrease analysis times and to improve peaks shape. A scale of eluotropic strength was established on the basis of methylene selectivity on PGC: increasing emperatures modify the eluotropic strength of organic solvents which allows the use of alcohols solvents, less toxic that those classically used in lipids analysis. An application was realized on complex mixtures of lipids to illustrate the potential of the µHTLC and PGC in separation of these molecular species. In addition, µHTLC was coupled with DEDL, mass spectrometer and aerosol charged detector (CAD), in order to position this latter in term of performance compared to the two others detectors and to study effects of µHTLC on detectors response. Finally, concerning the modulation of the selectivity by temperature, a study was realized based on analysis of triacylglycerols in isotherm and temperature gradient mode.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (182 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Notes bibliogr. en fin de chapitres

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine). Service Commun de la Documentation. Section Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 07PA114818 B
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