Évolution dirigée de la néocarzinostatine : ingénierie d’une ossature protéique alternative aux anticorps

par Antoine Drevelle

Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Biochimie

Sous la direction de Philippe Minard.


  • Résumé

    Les anticorps monoclonaux sont des outils moléculaires remarquables utilisés dans des applications thérapeutiques, diagnostiques et biotechnologiques. Néanmoins, certains inconvénients, liés à leur structure moléculaire, entraînent des coûts élevés de développement et de production. Malgré d’importants efforts de recherche ces limitations n’ont pu être dépassées. C’est pourquoi plusieurs laboratoires développent des ossatures alternatives aux anticorps monoclonaux. Il s’agit d’effectuer par évolution dirigée un remodelage fonctionnel sur une ossature protéique différente des anticorps et présentant des propriétés plus favorables. Les travaux décrits dans ce manuscrit concernent différents aspects du remodelage fonctionnel de la néocarzinostatine (NCS). Le chapitre I porte sur la résolution de structures de complexe NCS-ligand. Ces mutants de NCS sont capables de reconnaître de façon spécifique la testostérone, un ligand non naturel. Le chapitre II présente les résultats obtenus pour un projet d’optimisation de l’ossature NCS visant à supprimer ses ponts disulfure pour disposer d’une ossature fonctionnelle dans le compartiment cytoplasmique. Ce travail a permis d’isoler des mutants sans pont disulfure, exprimés sous forme soluble et repliée dans le cytoplasme bactérien. Ces mutants devraient permettre de développer des applications intracellulaires de type interférences à protéine. Le chapitre III concerne le remodelage des boucles exposées de la NCS dans l’objectif de créer des interactions protéine-protéine entre la NCS et des cibles d’intérêt. Ce chapitre décrit les outils développés pour construire une bibliothèque de mutants optimisée pour le repliement.

  • Titre traduit

    Directed evolution of neocarzinostatin : Engineering of an alternative proteic scaffold to antibodies


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    [Monoclonal antibodies are powerful tools in biomedical sciences. Nevertheless, they present some limitations, due to their molecular structures, responsible for high cost of development and production. Despite intense research, these limitations haven’t been overcome. That’s why several laboratories try to develop alternative proteic scaffold to monoclonal antibodies. They use directed evolution to perform functional remodelling of alternative scaffold with better properties. This work deals with functional remodelling of néocarzinostatine (NCS). The 1st chapter presents the structure of complexes between evolved NCS mutant and a new ligand. These mutants binds tightly an unnatural ligand : testosterone. The 2nd chapter present the results obtained for scaffold optimisation to cytoplasmic expression. The aim is to remove disulfide bonds of NCS-scaffold to allow cytoplasmic expression. This work has led to new mutants expressed in soluble and folded form in bacterial cytoplasm. Those mutants should allow the development of intracellular targeting applications. The 3rd chapter deals with functional remodelling of scaffold exposed loops to create new binding site for protein recognition. The strategy and developed tools to obtain high quality mutant library are described in this chapter. ]

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Informations

  • Détails : 1 vol. (335 p.)
  • Annexes : Bibliogr. en fin de chapitres

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(2007)185
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