Etude de deux nouveaux partenaires cellulaires de la protéine de matrice du virus de la stomatite vésiculaire : la dynamine 2 et CRM1

par Nicolas Richard

Thèse de doctorat en Structure, fonction et ingéniérie des protéines

Sous la direction de Yves Gaudin.

Soutenue en 2007

à Paris 7 .


  • Résumé

    La protéine de matrice (M, 229aa, 26kDa) du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est impliquée dans plusieurs étapes du cycle viral. Elle joue un rôle dans l'inhibition de la réponse antivirale de l'hôte, dans l'assemblage et dans le bourgeonnement des nouvelles particules virales. Pour réaliser ces fonctions, la protéine de matrice interagit avec plusieurs machineries cellulaires, comme celle des corps multivésiculaires ou le pore nucléaire. Pour identifier d'autres partenaires de la M, un crible double hybride a e��té réalisé et a permis l'identification de deux partenaires potentiels. Le premier est la dynamine. Cette protéine est impliquée dans la séparation des vésicules d'endocytose de la membrane plasmique. Les domaines d'interactions ont été identifié comme étant le domaine N-terminal de la M et le domaine d'homologie à la Pleckstrine de la dynamine. Par une approche de génétique inverse, nous avons mis en évidence que cette interaction était fonctionnelle. Cette interaction joue un rôle crucial dans les étapes d'assemblage juste avant le bourgeonnement. En particulier, nous montrons que la M interagit avec la dynamine afin d'inhiber l'endocytose de la cellule hôte ce qui favorise la formation de plates-formes d'assemblages virales. Le deuxième partenaire est CRM1. Cette protéine est impliquée dans l'export nucléaire. Nous avon: identifié une mutation sur la M abolissant l'interaction avec CRM1. Cette mutation a déjà été identifiée lors d'infections persistantes. L'interaction entre la M et CRM1 ne semble pas jouer de rôk dans la localisation cellulaire de M ni inhiber la fonction d'export de CRM1. La fonction de cette interaction reste donc à déterminer.

  • Titre traduit

    Study of two news cellular partner of the vesicular stomatitis virus matrix protein : dynamine 2 and CRM1


  • Résumé

    The vesicular stomatitis virus (VSV) matrix protein (M, 229aa, 26kDa) is involved in many steps during the viral cycle. M plays a key role in the assembly and budding of new viral particles. M inhibits the cell's antiviral response. M interacts and hijacks cellular functions like the nuclear pore complex to inhibit RNA's nuclear export and the multivesicular body machinery for budding. A yeast two hybrid screening was realized in the lab with the M protein as a bait to identify new cellular partners. Among all the positive clones, we found two proteins of interest during the viral cycle : dynamin and CRM1. The first one is dynamin. This protein is involved in the pinching of new endocytosis vesicles from the plasma membrane. The flexible amino-terminal part of M interacts with dynamin PH domains. A single mutation on M abolishes interaction with dynamin and reduce virus yield. Adaptation of mutant virus occurs rapidly allowing the isolation of revertants of which the M protein recovered a significant level of interaction with dynamin. We show that M-dynamin interaction inhibits clathrine dependant endocytosis and favours the accumulation of the viral glycoprotein at the plasma membrane thus allowing the formation of assembly platform. The second cellular partner is CRM1. This protein is involved in the export of protein which have : nuclear export signal. A mutation on M that abolishes interaction between CRM1 and M was discovered. This mutation is known to be involved in persistent infections. The M-CRM1 interaction seems to have no effect on M cellular localisation and on the cellular activity of CRM1. The exact role of this interaction remains unclear.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (183 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 346 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2007) 202
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