Assemblage in vivo des complexes snoRNP à boîte C/D

par Tanguy Lechertier

Thèse de doctorat en Structure, fonction et ingéniérie des protéines

Sous la direction de Pascal Roussel .

Soutenue en 2007

à Paris 7 .


  • Résumé

    Les complexes snoRNP à boîte C/D sont composés de quatre protéines core: 15. 5kD, Nop56, Nop58 et la méthyltransférase fibrillarine qui s'assemblent autour d'un snoRNA à boîte C/D. La fonction principale de ces complexes est de guider la 2'-O-méthylation de l'ARN ribosomique sur des nucléotides ciblés. Au cours de ce travail, nous avons cherché à comprendre les relations entre les différentes protéines du complexe snoRNP à boîte C/D dans un contexte cellulaire. Pour cela, nous avons mis au point une nouvelle approche de visualisation d'interactions protéiques in vivo. Cette approche consiste à relocaliser une prote��ine dans le compartiment granulaire du nucléole par fusion d'une séquence d'interaction avec une protéine majoritaire du nucléole, B23 et à analyser le comportement de ses partenaires potentiels. L'utilisation de cette technique nous permet d'établir que fibrillarine et Nop56 sont les seules protéines core à interagir in vivo. Cette interaction ne nécessite pas le domaine GAR de fibrillarine alors que son domaine en hélice alpha est indispensable. Nous montrons de plus que Nop56 et fibrillarine ne sont pas capables de s'intégrer seules aux complexes snoRNP contrairement au dimère fibrillarine-Nop56. Nos résultats nous permettent de proposer un nouveau modèle d'assemblage in vivo des complexes snoRNP à boîte C/D dans lequel le dimère fibrillarine-Nop56 s'associe aux pré-complexes snoRNP dans le nucléoplasme sans faire intervenir les corps de Cajal.

  • Titre traduit

    In vivo assembly of box C/D snoRNP complexes


  • Résumé

    Box C/D snoRNP complexes are composed of four core proteins namely 15. 5kD, Nop56, Nop58, and the methyltransferase fibrillarin, and one box C/D small nucleolar RNA. The primary function of the box C/D snoRNPs is to guide 2'-O-methylation of targeted ribosomal RNA nucléotides. Here, we investigated the relationships between the different core proteins of box C/D snoRNP complexes in a cellular context. For this purpose, we developed a new approach to visualize protein interactions in vivo. This approach consists in delocalizing a given protein to the granular component of the nucleolus by fusing to it a B23-interacting sequence and in following the fate of the potential partners of the protein. Using this technique, we analyzed the interactions between core proteins and show that fibrillarin-Nop56 is the only interaction occurring in vivo. This interaction does not involve the GAR domain but rather the alpha-helix domain of fibrillarin. We show that neither Nop56 nor fibrillarin are able to integrate individually the box C/D snoRNP complexes contrary to the dimer fibrillarin-Nop56. Consequently, we propose a new model of in vivo assembly of box C/D snoRNP complexes in which the fibrillarin-Nop56 dimer is recruited into box C/D snoRNPs in the nucleoplasm but outside of Cajal bodies.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (156 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 292 réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2007) 169
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