Cellules souches embryonnaires : une nouvelle source pour les cellules rénales ?

par Cécile Vigneau

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Jérôme Rossert.

Soutenue en 2007

à Paris 6 .


  • Résumé

    Les cellules souches embryonnaires (ES) peuvent se différentier in vitro en corps embryonnaires (EB), contenant des cellules des 3 lignages. Notre hypothèse est que les cellules ES, différenciées en EBs peuvent être enrichies en progéniteurs rénaux pouvant s’intégrer dans le parenchyme rénal in vivo. Nous avons utilisé une lignée de cellules ES murines, Lac-Z+ et dont le gène Brachyury (marqueur spécifique du mésoderme dont est issu le rein) a été associé au gène de la GFP. Les conditions de culture ont été optimisées (4 jours, 10ng/ml d’Activine A) pour générer des progéniteurs rénaux : Brachyury+, WT-1+, Cadhérine-11+, Pax-2+, Wnt-4+, CD-133+, CD-24+ et Oct-4+ ; séparés en 2 populations: Brachy+ et Brachy-. 5 jours après injection ex vivo dans des reins métanéphriques (E11. 5) en culture, les cellules Lac-Z/Brachy/GFP+ se localisent dans la zone néphrogénique, alors que les cellules Lac-Z/Brachy/GFP- s’intègrent dans le bourgeon urétéral. Apres injection in vivo directement dans le rein gauche de souris nouveau-nées, et jusqu'à 7 mois après, les cellules Lac-Z/Brachy/GFP+ s’intègrent dans les tubules proximaux sans développer de tératome. Les cellules Lac-Z/Brachy/GFP- s’intègrent dans différentes parties du rein mais principalement dans le tube collecteur. 12,5% de ces souris développent des tératomes, comme 20% des souris injectées avec les cellules ES non différenciées. En conclusion, les cellules ES peuvent être enrichies et sélectionnées pour des progéniteurs rénaux. Spécifiques des tubules proximaux, s’intégrant in vivo dans le parenchyme rénal normal, sans développer de tératome, ce qui offre de vraies perspectives thérapeutiques

  • Titre traduit

    Embryonic stem cells : new source for renal cells ?


  • Résumé

    In the absence of leukemia inhibitory factor (LIF) mouse embryonic stem (ES) cells give rise to embryoid bodies (EBs) that can differentiate into all 3 lineages including mesoderm from which kidney is derived. The generation of ES cell-derived progenitors offers potential for regenerative therapies. Since brachyury denotes mesoderm specification, we used a mouse ES cell-line with GFP knocked into the functional brachyury locus as well as lac-Z in the ROSA26 for use in cell selection and lineage tracing. Culture conditions were optimized (4 days, 10ng/ml Activin-A) to generate maximal numbers of renal progenitor populations identified by expression of the specific combination for renal progenitors : Brachyury, Cadherin-11, WT-1, Pax-2, Wnt-4, CD133, CD24 and Oct-4. LacZ/Brachy/GFP+ cells and LacZ/Brachy/GFP- cells were further selected by FACS. 5 days after injection into embryonic kidney explants in organ culture, LacZ/Brachy/GFP+ cells localized into blastemal cells of the nephrogenic zone while LacZ/T/GFP- cells incorporated in the ureteric bud. After a single injection into developing live newborn mouse kidneys, co-localization studies showed that the LacZ/Brachy/GFP+ cells were stably integrated into proximal tubules for 7 months without teratoma formation. LacZ/Brachy/GFP- cells got incorporated in different kind of tubules, preferentially in the collecting duct, but 12. 5% of the mice developed teratomas. It is concluded that defined differentiation of ES cells into EBs with Activin-A and selection for Brachyury expression provides a means to isolate and purify renal proximal tubular progenitor cells with the potential for safe use in regenerative therapies

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Informations

  • Détails : 1 vol. (122 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 93-102. 182 réf. bibliogr.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
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  • Cote : T Paris 6 2007 381
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