Etudes structurales de complexes multienzymatiques par cryomicroscopie électronique, reconstructions tridimensionnelles, modélisation moléculaire et recalage de données atomiques

par Magali Cottevieille

Thèse de doctorat en Biophysique moléculaire

Sous la direction de Nicolas Boisset.

Soutenue en 2007

à Paris 6 .


  • Résumé

    Dans le cadre de cette thèse, j’ai étudié la structure de complexes multienzymatiques par cryomicroscopie électronique et analyse d’images, associées à des approches originales. Avec l’étude de la glutamate synthase bactérienne, complexe multienzymatique de 1,2 MDa, de structure et stœchiométrie inconnues, la cryomicroscopie électronique et l’analyse d’images, couplées à des données de SAXS, ont permis de calculer un volume de densités électroniques à une résolution subnanométrique (9,5 Å). L’intégration des données de cristallographie des rayons X et des données issues de la modélisation par homologie, par des méthodes de recalage, ont permis de proposer un modèle pseudo-atomique du complexe entier. Avec l’étude du core-complexe (LH1-RC) de Rhodobacter veldkampii, petit complexe membranaire asymétrique (320 kDa) de structure inconnue, par cryomicroscopie électronique et analyse d’images, j’ai utilisé une approche originale permettant d’obtenir une structure à 12 Å de résolution.

  • Titre traduit

    Structural studies of multienzymatic compexes by cryoelectron microscopy, tridimensional reconstructions, molecular modelling and fitting of atomic data into density maps


  • Résumé

    In this thesis, two major studies of multienzymatic complexes by cryoelectron microscopy (cryoEM) and image analysis are presented, with original approaches. Bacterial glutamate synthase is a multienzymatic complex of 1. 2 MDa. Its structure and stoichiometry were unknown. With an approach integrating cryoEM, image analysis and small-angle X-ray scattering (SAXS), I obtained a cryoEM 3D map at a subnanometric resolution (9. 5 Å); fitting of atomic data from X-ray crystallography and homology modelling led to a pseudo-atomic model of the complex. The core complex (LH1-RC) of Rhodobacter veldkampii is a membrane complex of 320 kDa. Its structure and stoichiometry were also unkown. An original approach of 3D image processing was applied because of its small size, leading to a cryoEM volume at 12 Å resolution, with partial fitting of available atomic data.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (176 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 163-176. 226 réf. bibliogr.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 2007 16
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