Mise au point d'une stratégie de production de récepteurs couplés aux protéines G fonctionnels en quantités compatibles avec des études structurales

par Laure Arcemisbehere

Thèse de doctorat en Biochimie et biologie moléculaire

Sous la direction de Bernard Mouillac.


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  • Résumé

    Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) représentent la plus grande famille de protéines membranaires avec plus de 800 membres identifiés. Ils sont exprimés de manière ubiquitaire dans les cellules eucaryotes et impliqués dans la plupart des fonctions physiologiques. Ainsi, ils sont la cible de 50% des médicaments sur le marché. Malgré leur intérêt fondamental et thérapeutique, une seule structure tridimensionnelle est disponible ce qui limite la compréhension des relations structure-fonction pour les autres RCPG. Ce manque d'informations structurales est dû à leur faible niveau d'expression. Nous avons développé une stratégie de production de RCPG fonctionnels en quantité compatible avec des études structurales, basée sur l'accumulation des récepteurs sous forme de corps d'inclusion dans le cytoplasme d'Escherichia coli grâce à l'utilisation d'un nouveau partenaire de fusion, un fragment de l'intégrine alpha 5 humaine. Ce partenaire, le plus efficace jamais utilisé, prévient le ciblage des RCPG dans la membrane des bactéries et permet leur accumulation en grande quantité. Nous avons ainsi pu purifier plusieurs milligrammes de RCPG de différentes familles. La fonctionnalité des RCPG humains V2 de la vasopressine et BLT2 du leucotriène B4 renaturés a été démontrée au niveau de la liaison de leurs ligands respectifs et de l'activation de leurs protéines G spécifiques. Cette stratégie devrait faciliter les études structurales de résonance magnétique nucléaire et de cristallographie aux rayons X, et ouvrir la voie au développement rationnel de ligands sélectifs et de composés thérapeutiques.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (298 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 279-297

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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire. Section Médecine-Unité pédagogique médicale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TU 2007.MON-21
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  • Cote : TU 2007.MON-21
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