Développement de vecteurs adénoviraux pour la mucoviscidose : applications et perspectives en thérapie génique

par Ophélia Granio

Thèse de doctorat en Virologie

Sous la direction de Pierre Boulanger.

Soutenue en 2007

à Lyon 1 .


  • Résumé

    Les adénovirus (Ad) sont des agents de transfert de gène efficaces. Ils sont des vecteurs de choix pour l’étude de la mucoviscidose (MV). La MV est une maladie génétique, due à des mutations dans le gène CFTR, qui se caractérise par une atteinte respiratoire sévère. Nous avons étudié l’expression de la protéine CFTR fusionnée à la GFP apportée par un vecteur adénoviral dans des lignées cellulaires trachéales glandulaires et des cultures primaires pulmonaires. Notre construction GFP-CFTR s’est montrée parfaitement fonctionnelle et le signal GFP permet le suivi du produit du transgène dans la cellule. A haute dose virale, un effet négatif sur l’activité CFTR a été observé et associé à la voie d’entrée du virus dépendante de la base de penton. Un nouveau vecteur chimérique portant une fibre de sérotype 35 dépourvu de toxicité et exprimant la construction GFP-CFTR a été construit pour une application thérapeutique. Outre la MV, les vecteurs Ad ont été ciblés sur des lignées de cellules tumorales. Par insertion de molécules appelées Affibody™ fixant le domaine Fc des anticorps dans la fibre, les vecteurs ont pu être reciblés vers des marqueurs cellulaires de cancer du sein et ovarien


  • Résumé

    Adenoviruses (Ad) are efficient gene transfer vectors. In this study, Ad vectors were developed for cystic fibrosis (CF), a genetic disease characterized by pulmonary complications due to mutations in the CFTR gene. The aim of this work was to construct an Ad5/GFP-CFTR vector which would allow the tracking of both the cellular localization and chloride channel function of the CFTR protein in Ad-transduced cells. The gene delivery of GFP-CFTR by Ad to CFTR-deficient human airway epithelial and tracheal cells showed correction of chloride channel CFTR activity and apical localization of GFP-CFTR. However, the Ad5 vector showed inhibition of CFTR activity at high vector doses which was associated to the penton base-integrin entry pathway. A chimeric Ad5/Fi35 vector was developed which had no toxic effect on the CFTR activity and efficiently transduced lung cells. This work also concerned the re-targeting of Ad vectors to different cell types of interest. Novel Ad vectors with fibers carrying AffibodyTM molecules which bind the Fc domain of antibodies were developed to allow re-targeting of Ad to specific cell receptors using antibodies

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Informations

  • Détails : 1 vol. (227 p.)
  • Annexes : Bibliogr.p. 212-227

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T50/210/2007/98bis
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