Purification et caractérisation de l’alpha-glucosidase du suc digestif de l’escargot Archachatina ventricosa (Achatinidae) : Application à la synthèse de polyglucosylfructosides

par René Yadé Soro

Thèse de doctorat en Microbiologie et catalyse industrielles

Sous la direction de Alain Marty.

Soutenue en 2007

à Toulouse, INSA .


  • Résumé

    Les enzymes actives sur le saccharose ont depuis longtemps suscité un intérêt pour leur utilisation potentielle dans l’hydrolyse du saccharose ou la production de dérivés du saccharose à plus forte valeur ajoutée. Dans ce contexte, cette thèse avait pour objectifs de purifier à homogénéité et caractériser l’enzyme responsable de l’activité invertasique du suc digestif de l’escargot Archachatina ventricosa ainsi que la détermination d’une application potentielle de cette enzyme. Les techniques classiques de purification par chromatographie liquide sur différents gels n’ont pas permis de purifier l’enzyme. Nous avons donc eu recours à une combinaison entre une chromatographie d’échange d’ions et l’électrophorèse préparative en gel de polyacrylamide avec la détection spécifique de l’activité enzymatique in situ dans le gel de polyacrylamide par l’hydrolyse d’un substrat chromogène. L’enzyme isolée est une glycoprotéine homodimérique dont l’activité hydrolasique montre qu’il s’agit d’une -glucosidase. La cinétique de l’hydrolyse du saccharose par l’enzyme purifiée est caractéristique d’une réaction de transglycosylation ou d’une inhibition par excès de substrat. L’analyse des produits de l’hydrolyse du saccharose indique la synthèse d’oligosaccharides par le transfert de résidus glucosyles. Ces oligosaccharides sont constitués de maltooligosaccharides de tailles variables liés au glucosyle du saccharose par une liaison osidique alpha (14) (les polyglucosylfructosides de DP3 à DP8) et de disaccharides (maltose, isomaltose, nigerose) en quantité moindre. L’identification des produits a permis de proposer un schéma réactionnel pour leur synthèse à partir du saccharose

  • Titre traduit

    Purification and characterization of the alpha-glucosidase of the snail Archachatina ventricosa’s (Achatinidae) digestive juice : application in the synthesis of polyglucosylfructosides


  • Résumé

    Enzymes active against sucrose are of great interest because of their potential uses in sucrose hydrolysis and sucrose high cost derivatives synthesis. In this means, the objectives of this thesis were the purification and the characterization of the invertasic activity enzyme of the snail Archachatina ventricosa’s digestive juice and to determine a potential use of this enzyme. The liquid chromatography on gels haven’t help to purify the enzyme. We have to use a combination of ion exchange chromatography and preparative polyacrylamide gel electrophoresis with the specific detection of the enzyme activity in situ in the polyacrylamide gel by a chromogenic substrate hydrolysis. The isolated enzyme was an alpha-glucosidase with an homodimeric glycoprotein structure. The sucrose hydrolysis kinetics by the purified enzyme was characteristic of transglycosylation reaction or excess substrate inhibition. The analysis of sucrose hydrolysis products indicated the synthesis of oligosaccharides by the transfer of glucosyle moieties. These oligosaccharides are constituted by different DP maltooligosaccharides linked to the sucrose glucosyle by alpha (14) bound (so-called polyglucosylfructosides from DP3 to DP8) and of disaccharides (maltose, isomaltose, nigerose) in lesser amount. Products identification allowed their synthesis pathways from sucrose

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Informations

  • Détails : 1 vol. (183 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 147-161

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2007/890/SOR
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