Mécanismes d'action d'Alix et de ses partenaires ALG-2 et PYK2 dans la survie et la mort neuronale

par Flavie Strappazzon

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Jean-Marc Verna.

Soutenue en 2007

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .


  • Résumé

    'Les neurones granulaires de cervelet (NGC) survivrent en présence de forte concentration de potassium (K+ 25mM) mais meurent lorsque ils sont placés en milieu appauvri en potassium (5mM). Alix et Alg-2 contrôlent la mort in vitro de ces neurones induite par retrait de potassium. Les recherches que j'ai conduites au cours de ma thèse se sont attachées à définir les mécanismes moléculaires sous-tendant la fonction pro-apoptotique du couple Alix/ Alg-2. J'ai montré qu'Alix et Alg-2 s'associent à la pro-caspase-8, et vérifié la pertinence fonctionnelle de ces interactions dans le modèle de mort des NGC. Outre une implication d'Alix et d'Alg-2 dans la mort cellulaire induite par retrait de support trophique, j'ai mis en évidence la participation d'Alix à la cascade apoptotique déclenchée à la suite d'un stress au réticulum endoplasmique induit par une perturbation d'homéostasie calcique, ainsi qu'une association calcium¬dépendante du couple Alix/Alg-2 et la caspase-9. L'ensemble de nos résultats suggère que l'association calcium dépendante d'Alix avec Alg-2 pourrait favoriser le recrutement des caspase-8 et-9 au sein de plates¬ formes macromoléculaires, ce qui mènerait à leur activation. En outre je me suis également intéressée à Pyk2, un potentiel régulateur négatif du coulpe Alix/Alg-2. Nous avons montré que Pyk2 est impliqué dans la voie de survie des NGC en conditions dépolarisantes et que cette kinase s'active en milieu appauvri en K+ afin d'assurer une réponse de protection contre le stress.


  • Résumé

    Ln an effort to uncover the molecular mechanisms underlying the function of Alix and AIg-2 in cell death, we have found that Alix and AIg-2 can Ca2+-dependently associate with caspase-8 in BHK-21 cells. We investigated the possible existence of an Alix! AIg-2-caspase-8 relationship during cerebellar granule neuron death induced in vitro byeither potassium depletion or Alix overexpression. We showed that Alix is found in a caspase-8-containing complex following K+ depletion-induced CGN apoptosis. Moreover, we demonstrated that caspase-8 functions as initiator caspase in the apoptotic pathway induced by Alix overexpression. Ln a recent work, we gained evidence that the dosure of these Ca2+ channels, which follows the shift to K5 medium,could trigger compensatory Ca2+ mobilization from intracellular stores (Strappazzon, 2007). This prompted us to tum our attention to the putative functional relevance of Alix!Alg-2-caspase-8 interaction to ER stress-induced death. Using both dividing BHK-21 cells and post-mitotic CGN exposed to the ER stressor thapsigargin, we gathered several evidence supporting the idea that Alix, like its binding partner AIg-2, is involved in ER stress-induced death, linking specifficaly two initiator caspases: caspase-8 and -9. Overall our findings suggest that Alix, through its association with AIg-2, is a key mediator of the apoptotic Ca2+ signaling machinery. We also demonstrates the role of Pyk2 in mediating the trophic effect of membrane depolarization in CGN and its possible involvement in survival via the regulation of the binding between Alix and AIg-2 through phosphorylation of Alix.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (187 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.157 à 181

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS07/GRE1/0250/D
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  • Cote : TS07/GRE1/0250
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