Cartographie des sites d’insertion d’un vecteur dérivé du VIH-1 : Mise au point d’une technique à haut débit

par Julie Mantovani Bourgey

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Javier Perea.

Soutenue en 2007

à Evry-Val d'Essonne .


  • Résumé

    Une étape majeure du cycle de vie des rétrovirus est leur intégration dans le génome de la cellule hôte. Cette propriété a été avantageusement utilisée pour le développement de vecteurs de thérapie génique qui permettent une expression stable du transgène même après un certain nombre de divisions cellulaires. Néanmoins, l’utilisation de ces vecteurs a également révélé un risque lié à la mutagenèse insertionnelle. L’évaluation de ce risque passe par l’analyse de la distribution des sites d'intégration. J’ai développé une technique d’identification à « haut débit » des sites d'insertion d’un vecteur dérivé du VIH-1. Cette nouvelle technique appelée VITA, Vector Integration Tag Analysis, génére des étiquettes génomiques de 21 pb à proximité d’un site d'insertion. Leur concaténation permet d’augmenter le débit d’analyse des techniques existantes. Ce travail décrit la mise au point et la validation de la technique ainsi que les résultats de son application dans un projet pré-clinique.


  • Résumé

    A major step of the life cycle of retroviruses is their integration in the genome of the host cell. This property was advantageously used for the development of gene therapy vectors which allow stable transgene expression even after a certain number of cellular divisions. Nevertheless, the use of these vectors also revealed a risk due to insertional mutagenesis. The evaluation of this risk needs the analysis of the integration sites distribution. I developed a “high throughput” technique for the identification of insertion sites of a HIV-1 vector. This new technique called VITA, Vector Integration Tag Analysis, generates 21 bp long genomic tags at the vicinity of the insertion site. Their concatenation allows the increasing of the analysis flow of existing techniques. This work describes the development and the validation of the technique as well as the results of its application in a pre-clinic project.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (xii-241 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 219-240

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