Rôle d'ikaros dans l'érythropoïèse humaine : surexpression d'un dominant-négatif d'ikaros par une approche lentivirale

par Marilyne Dijon

Thèse de doctorat en Pathologie humaine. Oncologie

Sous la direction de Christian Chabannon.


  • Résumé

    Le gène Ikaros ou Lyf1 code pour le facteur de transcription Ikaros dont les multiples isoformes sont obtenues après épissage alternatif : certaines d’entre elles, comme Ikaros 6, sont dépourvues d’un domaine de liaison à l’ADN fonctionnel et possèdent un rôle de dominant-négatif. L’absence d’Ikaros chez la souris, entraîne des défauts de la lymphopoïèse, la myélopoïèse et l’érythropoïèse, cependant les étapes régulées par ce facteur sont encore largement méconnues. Afin d’approfondir les connaissances du rôle d’Ikaros au cours de l’érythropoïèse, nous avons surexprimé un dominant-négatif d’Ikaros, Ikaros 6, à l’aide d’un vecteur lentiviral. Ces vecteurs, dérivés du virus du HIV-1, permettent d’augmenter l’efficacité du transfert de gènes dans les cellules souches hématopoïétiques (HSC) sans modifier leur propriété de multipotence. Nous avons élaboré un vecteur comportant deux gènes sous le contrôle de deux promoteurs distincts, afin de pouvoir détecter les HSC humaines transduites. Cependant, cette construction n’est pas fonctionnelle dans notre système expérimental. La surexpression du dominant-négatif d’Ikaros, Ikaros 6, à l’aide d’un vecteur lentiviral à une unité transcriptionnelle, entraîne un défaut du nombre de cellules en culture associé à une augmentation de la mort cellulaire. Le blocage de la fonction d’Ikaros influence également l’expression des gènes érythrocytaires ainsi que l’hémoglobinisation. Par cette étude, nous avons donc pu mettre en évidence un rôle important d’Ikaros au cours de l’érythropoïèse humaine.

  • Titre traduit

    Involvment of ikaros in human erythropoiesis : overexpression of ikaros dominant-negative isoform using lentiviral vector


  • Résumé

    Hematopoiesis is a complex process which is regulated by expression of many transcription factors, such as Ikaros. This gene encodes several isoformes by alternative splicing : some of them without functional DNA binding act as dominant-negative. Lack of Ikaros induced defects of lymphopoiesis, myelopoiesis and erythropoiesis, however, critical steps regulated by Ikaros are largely unknown. To study further Ikaros involvement in erythropoiesis, we overexpressed a dominant-negative isoform, Ikaros 6, using lentiviral vector. This type of vector, derived from HIV-1, is main tool to tranfer gene into hematopoietic stem cells without alter multipotence properties. We developed a lentiviral vector containing two genes controlled by two different promoters to detect transduced HSC. However, problems of gene expression showed unfunctionally construct in our experimental system. Study of Ikaros in human erythropoiesis will be realised with basal lentiviral vector. Overexpression of dominant-negatif, Ikaros 6, displayed a defect of erythroid cell number and an increase of cell death. Inhibited function of Ikaros also induced a decrease of erythroid gene expression and hemoglobinisation. This work underlined important role of Ikaros in human erythropoiesis by regulating of erythroid gene expression.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (151 f.)
  • Annexes : Bibliogr., 396 réf.

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  • Bibliothèque : Université d'Aix-Marseille (Marseille. Timone). Service commun de la documentation. Bibliothèque de médecine - odontologie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T2007/AIX2/0668Ubis
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