Analyse protéomique de la membrane du spermatozoïde et de son milieu environnemant au cours de la maturation épididymaire

Protéomic analysis of sperm membrane and it's surrounding medium during epididymal maturation

• Auteur / Autrice : Clémence Belleannée
• Direction : Françoise Dacheux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie
• Date : Soutenance en 2006
• Etablissement(s) : Tours

Mots clés

Mots clés contrôlés

Fécondation

Reproduction (biologie)

Protéines

Protéomique

Protéines membranaires

Spermatozoïdes

Épididyme

Résumé

Mammalian spermatozoa acquire the ability to fertilize ovocyte during their transit throught epididymis where they are submitted to biochemical modifications under environmental control. These modifications mainly concern sperm surface proteins which are minor coumpounds. In boar, we developped a methodology based on labeling, differencial extraction and purification of sperm surface proteins which allowed identification by nano-LC/MS/MS of more than 170 compounds. By the help of quantitative approaches (1D-2D electrophoresis, iTRAQ) comparative analysis of these proteins in successive epididymal regions ensured identification of biomarkers of maturation. Sperm surface proteins were caracterized in two other species: bull and horse. Thanks to analysis of remaining (proteome) and secreted (secretome) proteins in bovine fluid from different epididymal regions, new luminal proteins were identified. All together these results open perspectives in individual caracterization of proteins related to epididymal maturation and/or fertility.

Chez les mammifères, les spermatozoïdes ne sont fécondants qu’après leur transit dans l’épididyme où ils subissent des modifications biochimiques sous contrôle du milieu environnant. Ces modifications concernent essentiellement des protéines de surface peu connues car minoritaires. Chez le verrat, la mise au point d’une technique de marquage et de purification des protéines de surface a permis d’identifier par nano-LC/MS/MS plus de 170 composés. L’analyse différentielle de ces protéines par diverses approches quantitatives (electrophorèse 1D-2D, iTRAQ) en fonction des régions épididymaires a permis l’identification de nouveaux marqueurs de maturation. Cette approche a également été appliquée chez le cheval et le taureau pour une étude comparative. Chez le taureau, l’analyse des protéines présentes (protéome) et sécrétées (sécrétome) dans les différentes régions épididymaires, nous a permis d’identifier de nouvelles protéines luminales dont le rôle dans la maturation des spermatozoïdes est encore inconnu. Ces résultats ouvrent des perspectives de caractérisation individuelle de protéines candidates en relation avec l’acquisition de la fertilité.