Vers la conception d'inhibiteurs de la glucosamine-6P synthase par assemblage de fragments : sélection des fragments assistée par le substrat

par Ludovic Maillard

Thèse de doctorat en Pharmacie

Sous la direction de Bernard Badet.


  • Résumé

    Une approche de type assemblage de fragments a été employée pour rechercher de nouveaux inhibiteurs de la glucosamine-6P synthase (Glms ou Gfat). Cette enzyme qui catalyse la synthèse de la glucosamine-6P à partir du fructose-6P et de la glutamine est responsable de l'étape limitante de la biosynthèse des hexosamines. Dans la stratégie envisagée, le fructose-6P a été utilisé comme plateforme reconnue par l'enzyme pour véhiculer les constituants d'une banque d'alcoxyamines vers le site actif de l'enzyme. Le criblage a ensuite consisté en un test d'inhibition de l'activité enzymatique. Les différentes étapes ayant permis l'identification d'une première série de fragments sont présentées: élaboration d'une nouvelle synthèse en parallèle et sur phase solide d'alcoxyamines, synthèse d'une banque d'éthers d'oxime du fructose-6P, mise au point d'un nouveau test enzymatique par spectrométrie de masse (MALDI-TOF) et résultats du criblage enzymatique.


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  • Titre traduit

    Towards the design of glucosamine-6P synthase inhibitors through a fragment-based approach : a substrate-addressed fragment strategy


  • Résumé

    A fragment-based approach has been considered to design new inhibitors of glucosamine-6P synthase (Glms). This enzyme catalyzes the formation of glucosamine-6P from fructose-6P. Identification of low affinity ligands as well as elucidation of their binding site is often a limiting step. An alternative strategy where the fragments are tethered to the substrate to increase their affinity for the enzyme and to address them to the protein binding-site is proposed. Fructose-6P was used as a platform to target the components of an alkoxyamine library towards the active site of the enzyme via oxime formation. Fragments able to interact with Glms were selected from in-vitro enzymatic activity assay. The overall process leading to the identification of a first series of fragments is presented: development of a parallel solid phase synthesis of alcoxyamines, preparation of fructose-6P oxime ether library, development of a new enzymatic assay for Glms by mass spectrometry and results of screening.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (X-273 f., 6 f. dépl.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Réf. bibliogr

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine). Service Commun de la Documentation. Section Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 06PA114812 B
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