Rôle et régulation des isoformes de la MAPKinase Kinase Kinase B-Raf

par Isabelle Hmitou

Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Biologie cellulaire et moléculaire du développement

Sous la direction de Alain Eychène.

Soutenue en 2006

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des Sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .


  • Résumé

    La sérine/thréonine kinase B-Raf est impliquée dans de nombreux processus cellulaires chez les Métazoaires. Le gène B-raf code plusieurs isoformes résultant d'épissage alternatif. La présence des séquences codées par les exons alternatifs 8b et 9b, situées entre le domaine régulateur et le domaine kinase de B-Raf, module les propriétés biochimiques et oncogéniques de B-Raf : l'exon 9b augmente l'activité kinase et l'interaction avec MEK, l'exon 8b les diminue. Mon travail de thèse a eu pour objectif à la fois de comprendre les bases moléculaires du mécanisme de régulation différentielle des isoformes de B-Raf et également d'analyser leur importance fonctionnelle. J'ai ainsi montré que la présence des séquences codées par les exons 8b et 9b interférent avec l'autoinhibition du domaine régulateur sur le domaine kinase. Ces séquences interfèrent également avec la phosphorylation des résidus S365 et S429 situés dans la même région charnière, indépendamment des interactions intramoléculaires. Ainsi, alors que le niveau de phosphorylation de la S365 est modulé par la présence des exons, la phosphorylation de la S429 n'est pas modulée par les séquences alternatives mais aurait des conséquences différentes en fonction de l'isoforme. D'autre part, afin de comprendre le rôle physiologique des isoformes de B-Raf contenant les séquences codées par les exons 8b et 9b, nous avons généré des lignées de souris pour lesquelles la délétion conditionnelle de ces exons est rendue possible grâce à l'approche Cre/Lox. L'obtention de souris invalidées pour les exons 8b et 9b permettra de mieux comprendre le rôle spécifique des isoformes de B-Raf, en particulier au cours du développement.

  • Titre traduit

    Role and regulation of B-Raf isoforms


  • Résumé

    The B-Raf serine/threonine kinase is involved in many cellular processes in Metazoans. The B-raf gene encodes several isoforms resulting from alternative splicing. The presence of the sequences encoded by exons 8b and 9b, located between the regulation domain and the kinase domain of B-Raf, modulates the biochemical and oncogenic properties of B-Raf: the exon 9b increases the kinase activity and the interaction with MEK, the exon 8b decreases them. My work aimed at the same time to understand the molecular basis of the mechanism of differential regulation of B-Raf isoforms and also to analyze their functional roles. I thus showed that the presence of the sequences encoded by exons 8b and 9b interferes with the autoinhibition of the regulation domain on the kinase domain. These sequences also interfere with phosphorylation of the residues S365 and S429 located in the same hinge region, independently of the intramolecular interactions. Thus, whereas the phosphorylation level of S365 is modulated by the presence of exons, the phosphorylation of S429 is not modulated by the alternative sequences but would have different consequences according to the isoform. In addition, in order to understand the physiological role of the B-Raf isoforms containing the sequences encoded by exons 8b and 9b, we generated mice strain lines in which the conditional deletion of these exons is possible by a Cre/Lox strategy. Obtaining mice invalidated for exons 8b and 9b will render possible to better understand the specific role of B-Raf isoforms, especially during development.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (190 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 157-177

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