Instabilité du minisatellite humain CEB1 chez la levure Saccharomyces cerevisiae en absence de Rad27/FEN1 et Pif1

par Cyril Ribeyre

Thèse de doctorat en Génétique humaine

Sous la direction de Alain Nicolas.

Soutenue en 2006

à Paris 7 .


  • Résumé

    Tous les organismes possèdent des séquences répétées en tandem dont la caractéristique principale est leur instabilité. Néanmoins, elles possèdent des rôles fonctionnels et sont impliquées dans des pathologies. Deux grands types existent : les microsatellites (motifs inférieurs à 10 pb) et les minisatellites (motifs supérieurs à 10 pb). Certains minisatellites humains, appelés hypervariables, sont très instables en méiose mais relativement stables en mitose. L'insertion du minisatellite humain hypervariable CEB1 chez S. Cerevisiae a permis de dévoiler les différences existant entre l'instabilité méiotique et mitotique. Il apparaît clair que l'instabilité mitotique est due à des défauts durant la réplication. En effet, l'inactivation de la protéine très conservée Rad27/FEN1, impliquée dans la réplication du brin tardif, augmente très fortement la fréquence de réarrangement mitotique. Pour la première fois nous avons séquence deux allèles humains de CEB1 (CEB1-1. 8 et CEB1-0. 6), mettant en évidence un très haut niveau de polymorphisme. Le séquençage de 47 réarrangements de CEBL 1-8 obtenus chez rad27Δ nous a conduit à observer des réarrangements extrêmement complexes, ces derniers pouvant être formés en une seule génération. Nous avons également montré que la formation des réarrangements se fait selon la voie de la recombinaison homologue. Au cours de ce travail, un autre mutant déstabilisant CEB1, pif1Δ a été identifié. Pif1 est une ADN hélicase 5'-3' dont la fonction majeure est de réguler négativement la télomérase. Les paramètres de l'instabilité de CEB1 sont les mêmes que pour rad27Δ, en revanche contrairement à rad27Δ qui déstabilise toutes les séquences répétées en tandem testées, seul CEB1 est instable chez pif1Δ. Du fait de la structure spécifique de CEB1 (très riche en G/C) Pif1 pourrait jouer un rôle spécifique durant la réplication de ces séquences, notamment en les protégeant de l'action de la télomérase.

  • Titre traduit

    Instability of human minisatellite CEB1 in the absence of Rad27/FEN1 and Pif1


  • Résumé

    Genomes contain numerous unstable tandem repeats sequences. They play functional roles in the cell and are involved in human pathologies. Two main types exist: microsatellites (less than 10 bp motifs) and minisatellites (more than 10 bp motifs). In human one specific class of minisatellites (hypervariables) is highly unstable in germline, although, the mitotic instability is weak. Hypervariable CEB1 minisatellite was previously inserted in S. Cerevisiae and it allowed us to understand the differences between mitotic and meiotic instability. Indeed, mitotic instability is more likely related to replication defects, for example CEB1 is highly unstable in the absence of the highly conserved Rad27/FEN1 protein involved in lagging strand replication,. For the first time we sequenced two human CEB1 alleles (CEB1-1. 8 and CEB1-0. 6). They exhibit a high level of polymorphism between them. The sequencing of 47 CEB1-1. 8 rearrangements obtained in rad27A cells leads to the observation of extremely complex events. Moreover we showed that they occur in a single generation. Finally we demonstrated that rearrangements occur by homologous recombination. We identified another mutant, pif1Δ, which destabilizes CEB1. Pif1 is a 5'-3' DNA helicase involved in negative regulation of telomerase. Concerning CEB1 instability, pift1Δ and rad27A share the same features, but, in contrast with rad27A which destabilizes ail the repeated sequences tested, only CEB1 is unstable in p/f/A. Due to CEB1 atypicai structure (highly G/C rich) Pif1 might play a role during replication of such sequences, maybe by removing the telomerase.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (222 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 430 réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2006) 193
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.