Etude du complexe de réplication du virus de la mosaïque jaune du navet (TYMV) : assemblage et régulation

par Anna Jakubiec

Thèse de doctorat en Génétique

Sous la direction de Isabelle Jupin.

Soutenue en 2006

à Paris 7 .


  • Résumé

    Le virus de la mosaïque jaune du navet (ou TYMV) possède un génome constitué d'ARN de polarité positive. Il code trois protéines, dont une - la 206K - est essentielle à la replication virale. Des études in vitro et in vivo ont permis de montrer que cette protéine subit un clivage générant les produits 140K, contenant les domaines méthyltransférase (MT), protéase (PRO) et hélicase (HEL), et 66K, qui correspond à l'ARN polymérase ARN-dépendante (POL). Au cours de ma thèse j'ai étudié les interactions entre ces protéines et le déterminisme de leur adressage subcellulaire dans le but de mieux comprendre le processus d'assemblage des complexes de replication. Ces travaux ont abouti à un modèle selon lequel la 66K est recrutée dans les complexes de replication par le biais de son interaction avec le domaine PRO de la 140K, portant les déterminants d'adressage aux membranes cibles. A l'aide d'antiséra spécifiques de différents domaines du précurseur 206K nous avons pu montrer que la 140K subit in vivo au moins un clivage supplémentaire, qui donne lieu à la formation deux produits : 92K, portant les domaines MT et PRO, et 42K qui correspond au domaine HEL. Des résultats préliminaires indiquent que ce clivage n'est pas essentiel à la replication, mais qu'il contribue à son efficacité. Finalement, nous avons pu montrer que la polymérase 66K est phosphorylée in vivo et les sites de phosphorylation ont pu être caractérisés. La phosphorylation aurait au moins deux fonctions au cours du cycle viral : elle serait impliquée dans le contrôle de la stabilité de la polymérase et dans la régulation de l'équilibre entre les différents types d'ARN viraux synthétisés au cours du cycle viral.

  • Titre traduit

    Replication complex of Turnip yellow mosaic virus (TYMV) : cassembly and regulation


  • Résumé

    Turnip yellow mosaic virus (TYMV) has a positive-stranded RNA genome encoding three proteins, one of which - the 206K -is essential for viral replication. In vitro and in vivo studies have revealed that the 206K is cleaved into two products: the 140K containing domains indicative of methyltransferase (MT), proteinase (PRO) and helicase (HEL) activities and the 66K encompassing RNA-dependent RNA polymerase. During my PhD I studied interactions between these proteins and determinants of their subcellular localisation in order to gain insight into molecular mechanisms underlying the assembly of viral replication complexes. This work supports a model wherein the 66K is recruited to the replication sites through an interaction with the PRO domain of the 140K, which is the membrane tether for viral replication complexes. Using antisera directed against different domains of the 206K precursor, we showed that the 140K was further processed in vivo into two products: 92K, containing the MT and PRO domains and 42K encompassing the HEL domain. Preliminary results indicate that the cleavage is not essential, but it is required for efficient viral replication. Eventually, we showed that the 66K polymerase was phosphorylated in vivo and several phosphorylated residues were identified by mass spectrometry analysis. Site directed mutagenesis experiments suggest two distinct functions for the 66K phosphorylation. We propose that phosphorylation in the N-terminal PEST sequence controls the metabolic stability of the 66K polymerase, while phosphorylation of its catalytic domain is involved in the regulation of viral RNA synthesis in the course of viral infection.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (204 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 334 Réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2006) 111
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