Etude structurale et fonctionnelle des antigènes PfEMP1 et AMA1 de Plasmodium

par Sébastien Igonet

Thèse de doctorat en Structure, fonction et ingéniérie des protéines

Sous la direction de Graham Bentley.

Soutenue en 2006

à Paris 7 .


  • Résumé

    Le paludisme est une maladie infectieuse qui reste associée à une mortalité élevée. L'agent infectieux responsable est le parasite Plasmodium. Notre intérêt s'est porté sur la protéine PfEMP1 codée par le gène var O. L'expression hétérologue des différents domaines de PfEMP1 var O, qui représente une difficulté majeure dans l'étude de ce type de protéine, a été étudiée dans les systèmes E. Coli et baculovirus. Les domaines recombinants var O NTS-DBL1α1 et DBL2b-C2 ont été produits dans les deux systèmes sous forme soluble. L'étude de ces protéines par protéolyse ménagée et dichroïsme circulaire a montré que chaque protéine était repliée de manière équivalente dans les deux systèmes d'expression. Les anticorps monoclonaux obtenus chez la souris contre ces domaines recombinants reconnaissent la surface des globules rouges infectés exprimant le variant O. D'autre part, les anticorps polyclonaux murins dirigés contre le domaine NTS-DBL1α1 bactérien et baculovirus inhibent la formation des rosettes du variant O. Nous avons également poursuivi une étude structurale sur la protéine AMA1 de P. Vivax, dont la structure cristalline a été récemment résolue au laboratoire, afin d'analyser l'antigénicité de cette protéine. Nous avons déterminé par cristallographie des rayons , la structure d'un complexe entre l'antigène PvAMA1 et le fragment Fab de l'anticorps monoclonal murin F8. 12. 19, qui montre une réactivité croisée sur d'autres espèces Plasmodium, ainsi qu'un second complexe entre le Fab F8. 12. 19 et l'antigène AMA1 de P. Falciparum. La structure de ces deux complexes montre que l'anticorps s'adapte aux deux antigènes homologues malgré les différences en acides aminés.

  • Titre traduit

    Functions and signalisations of lutheran cell adhesion molecules, receptors for alphas chain of laminins


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Malaria is an infections disease which remains associated with a high mortality. The infectious agent causing malaria is the Plasmodium parasite. Our interest has centered on the PfEMP1 variant encoded by the var O gene. Heterologous expression of different domains of var O PfEMP1, which presented major problems during this study, was performed in E coli and baculovirus Systems. The recombinant NTS-DBL1α and DBL2b-C2 var O domains were produced in the two expression Systems in soluble form. Studies using limited proteolysis and circular dichroism showed that the two Systems expressed equivalently folded products in each case. Murine monoclonal antibodies raised against these recombinant domains recognize the surface of red blood cell infected with the O variant parasite. In addition, murine polyclonal antibodies raised against either the bacterial or baculovirus NTS-DBL1α inhibit the formation of the variant O rosettes. A structural study of AMA1 from P. Vivax, whose crystal structure was recently solved at the laboratory, was made as part of a program to analyse the antigenicity of this protein. We solved the crystal structure of a complex formed between PvAMA1 and the Fab fragment of the murine anti-PvAMA1 monoclonal antibody F8. 12. 19, which cross-reacts with AMA1 from several other plasmodial species, and also a second complex between the Fab F8. 12. 19 and AMA1 from P. Falciparum. The structures of these two complexes show how the antibody adapts to the two homologous antigens in spite of the amino acid differences.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (257 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 258 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2006) 05
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