Déterminants moléculaires de la spécificité d'espèce portés par le complexe polymérase des virus grippaux de type A

par Emmanuel José Dos Santos Afonso

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Brigitte Gicquel.

Soutenue en 2006

à Paris 7 .


  • Résumé

    En règle générale les virus grippaux aviaires ne se multiplient pas chez l'homme. Cependant, leur transmission et leur adaptation à l'homme peut donner lieu à des pandémies dévastatrices, comme en 1918. Nous avons observé que le défaut d'activité de complexes polymérases dérivés de virus aviaires dans des cellules de mammifères était déterminé principalement par la sous-unité PB2 du complexe, et lié à un défaut d'association avec la nucléoprotéine virale. Dans leur ensemble, les résultats obtenus suggèrent que la protéine PB2 pourrait jouer un rôle déterminant dans les phénomènes de restriction d'hôte de par sa position au coeur d'interactions moléculaires mettant en jeu à la fois la nucléoprotéine et un ou plusieurs facteurs cellulaires. Ces données nous ont incités à rechercher les interacteurs cellulaires du complexe polymérase, et en particulier ceux qui sont déterminants vis-à-vis du potentiel de multiplication des virus grippaux chez l'homme. Dans ce but, nous avons produit par génétique inverse un virus grippal exprimant une protéine PB2 fusionnée à l'étiquette de purification « One-STrEP-tag », ce qui nous a conduit à cartographier les signaux nécessaires à l'emballage du segment PB2. A partir d'extraits de cellules infectées, des protéines cellulaires ont été co-purifiées avec le complexe polymérase et sont en cours d'identification par spectrométrie de masse. En complément de cette approche biochimique, des interacteurs du complexe polymérase ont été recherchés par la méthode du double-hybride dans la levure. L'importance fonctionnelle des protéines identifiées par l'une ou l'autre des approches reste à évaluer dans le contexte du cycle de réplication virale.

  • Titre traduit

    Molecular determinants of host-range on the polymerase complex of influenza A viruses


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Avian influenza A viruses usually do not replicate efficiently or cause disease in humans. However, adaptation to humans may occur and resuit in a devastating influenza pandemie, as was the case in 1918. There is growing evidence that the viral RNA polymerase complex is involved in host restriction. We observed that in human cells, polymerase complexes of avian origin showed reduced transcription/replication activity as compared to polymerase complexes of human origin. This defect was determined mainly by the PB2 sub-unit of the complex, and was related to a defect in binding to the viral nucleoprotein. Taken together, our data suggest that PB2 could be a major determinant of host-range due to its pivotal role in molecular interactions involving both the viral nucleoprotein and cellular proteins. These data prompted us to search for cellular factors interacting with the polymerase complex, and possibly involved in host restriction. To this end, we generated recombinant influenza A viruses expressing a PB2 protein tagged with the « One-STrEP-tag » purification tag, which led us to the mapping of packaging signals on the PB2 segment. Cellular factors were co-purified with the polymerase complex from infected cells extracts, and are being identified using mass spectrometry analysis. In addition to the biochemical approach, the yeast two-hybrid method was used to identify cellular partners of the viral polymerase complex. The functional role of the proteins identified by one or the other approach remains to be determined in the context of the viral life cycle.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (151 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 227 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2006) 02
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