Rôle du récepteur de la thrombine PAR-1 dans l'expansion des progéniteurs endothéliaux

par David Smadja

Thèse de doctorat en Pharmacie

Sous la direction de Pascale Gaussem.

Soutenue en 2006

à Paris 5 .


  • Résumé

    La transplantation des progéniteurs endothéliaux circulants (PEC) améliore la néovascularisation dans des modèles pré-cliniques d’ischémie. Leur faible nombre dans la circulation sanguine est un handicap pour leur utilisation en thérapie cellulaire, et la mise au point d'un procédé d’expansion des PEC à partir du sang circulant est une étape indispensable. La caractérisation des PEC en culture durant une expansion in vitro de 5 semaines nous a permis de mettre en évidence la présence à un niveau stable du récepteur à la thrombine PAR-1 en surface cellulaire, ainsi qu’une augmentation significative de l’expression du récepteur au VEGF, VEGFR2/KDR. Des anomalies vasculaires chez la souris invalidée pour le gène du PAR-1 ont été récemment décrites, suggérant un rôle de ce dernier dans le développement embryonnaire de l’arbre vasculaire. Etant donné le rôle émergent des PEC dans la néo-vasculogenèse, nous avons étudié le rôle du PAR-1 sur ces cellules via son activation par le peptide agoniste SFLLRN. L’activation des PEC ne modifie ni le nombre, ni la cinétique d’apparition des colonies de PEC issus de sang de cordon. L’activation du PAR-1 induit en revanche un effet prolifératif sur les PEC, dépendant de la synthèse d’angiopoïétine 2. Cet effet s’accompagne de la réorganisation du cytosquelette d'actine, favorisant la migration spontanée des PEC en chambre de Boyden et leur migration dirigée vers le SDF-1 grâce à l’augmentation de CXCR-4. Le traitement des PEC par le peptide SFLLRN induit également une augmentation de la formation des pseudo tubes vasculaires en Matrigel, sous la dépendance du système SDF-1/CXCR-4. Nos résultats confirment le rôle du PAR-1 dans l’angiogenèse et ouvrent des perspectives dans le cadre de la mise au point d’un procédé d’expansion in vitro des PEC. Toutefois, les effets de l’activation du PAR-1 des PEC de sang de cordon ne sont que peu ou pas retrouvés sur les PEC isolés à partir de sang périphérique, ce qui souligne l’intérêt de mobiliser une population de cellules plus immatures d’origine médullaire.

  • Titre traduit

    Role of the thrombin receptor PAR-1 in endothelial progenitor cells angiogenic properties


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    The injection of endothelial progenitor cells (EPCs) in preclinical models of ischemia has been shown to enhance neovascularization. However, the scarcity of EPCs in human peripheral blood is a limitation for of its use as a cell therapy product, and the development of an expansion procedure is a crucial issue. In this work, we have characterized EPCs during in vitro expansion, using EPCs derived from cord blood CD34+ cells. An increased expression of KDR/VEGFR2 along expansion was observed, together with an increase of in vitro angiogenic properties. We also show the presence of the thrombin receptor PAR-1 on expanded EPCs. The importance of PAR-1 in blood vessel development has been demonstrated in knockout mice. As EPCs are thought to be involved in postnatal vasculogenesis, we examined the effect of PAR-1 activation on EPCs. PAR-1 activation induced EPCs proliferation, resulting of an angiopoietin 2 upregulation. PAR-1 activation also enhanced actin reorganization, promoting both spontaneous migration in a Boyden chamber assay and migration toward SDF-1. Finally, PAR-1 stimulation by SFLLRN increased the formation of capillary-like structures formed by EPCs in Matrigel, and this effect was abrogated by anti-CXCR-4 and anti-SDF-1 antibodies. All together, PAR-1 activation on cord blood derived EPCs led to a proangiogenic effect. In vivo, enhancement of angiogenic properties of EPCs by thrombin generated at the target site might promote vasculogenesis and thrombus resorption. Our data suggest that SFLLRN peptide could be used to expand cord blood derived-EPCs ex vivo. However, this effect was not found on EPCs isolated from adult blood, underlining the usefulness of a procedure designed to mobilize immature endothelial cells from bone marrow to peripheral blood.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (178 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 166-178

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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TPHB 9758
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
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