Etude du rôle et de l'expression de la VE-statine (egfl7)

par Bertrand Caetano

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Fabrice Soncin.

Soutenue en 2006

à Lille 2 .


  • Résumé

    Notre équipe a récemment découvert le gène VE-statine (ou egfl7) et montré qu'il s'exprime spécifiquement dans les cellules endothéliales des vaisseaux sanguins embryonnaires. Ce gène code pour une protéine sécrétée de 30 kDa : la VE-statine ou ‘Vascular Endothelial-statin', qui a peu d'homologie de structure avec d'autres protéines connues, excepté deux domaines ‘Epidermal Growth Factor' (EGF) et un domaine Emilin (EMI). In vitro, la VE-statine est capable d'inhiber la migration des cellules musculaires lisses induite par le PDGF-BB. In vivo, la diminution d'expression d'egfl7 chez le poisson zèbre (danio rerio) provoque des anomalies vasculaires et perturbe la tubulogenèse, avec pour conséquence l'absence de circulation sanguine. Le rôle physiologique de la protéine et ses mécanismes d'action sont encore très peu connus. Afin d'évaluer le rôle de la VE-statine chez l'adulte, nous avons étudié son patron d'expression dans diverses situations normales ou pathologiques, par hybridation in situ et RT-PCR quantitative en temsp réel. L'expression de ce gène est ainsi retrouvée dans tous les tissus adultes analysés et, comme chez l'embryon, exclusivement au niveau des cellules endothéliales. Nous avons mis en évidence une répression de l'expression du gène par les cytokines pro-inflammatoires IL1-, IL1- et TNF- dans les cellules endothéliales. Cet effet implique le facteur NF-B et fait intervenir des phénomènes épigénétiques de régulation de l'acétylation des histones. Nous avons d'autre part cloné l'ADNc de la VE-statine dans un vecteur d'expression et mis au point la production et la purification de la protéine recombinante afin d'étudier la réponse des cellules musculaires lisses aortiques à la stimulation par la VE-statine. Enfin, la recherche de gènes cibles régulés par la VE-statine dans les cellules musculaires lisses stimulées par le PDGF-BB est en cours d'une approche de puces à ADN.


  • Résumé

    VE-statine (or egfl7) is a novel gene recently discovered by our team which is specifically expressed by endothelial cells of embryonic blood vessels. The gene codes for a 30kDa secreted protein, VE-statin (Vascular Endothelial-statin), which shares no clear structural homology with other known proteins, except for two Epidermal Growth Factor (EGF) domains and an Emilin (EMI) domain. In vitro, VE-statin inhibits PDGF-BB-induced smooth muscle cell migration. In vivo, egfl7 knockdown in the zebrafishinduces major vascular defects, with a defective tubulogenesis and a lack of blood flow. Despite these results, the physiological role of the protein and its mechanisms of action remain largely unknown. We have studied the VE-statin expression pattern in various normal and pathological situations in adults using in situ hybridization and real-time quantitative RT-PCR. We have shown that VE-statin is expressed in all tissues analysed, and like in the embryo, exclusively in endothelial cells. Moreover, expression of the gene is down-regulated by pro-inflammatory cytokines IL1-, IL1- and TNF-. The NF-B nuclear factor is involved in this effect, as well as epigenetic machanisms, especially those involving the regulation of histone acetylation. In addition, we have cloned the VE-statin cDNA in an expression vector and designed a protocol for the production and purification of the mouse recombinant protein, with the aim of studying aortic smooth muscle cell response to VE-statin. Finally, we have initiated a micro-array analysis in order to identify VE-statin regulated genes in smooth muscle cells.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (145 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 126-141

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  • Bibliothèque : Université du droit et de la santé. Service Commun de la Documentation. BU Santé - Learning center.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 50.379-2006-43-C
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 7176
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