Exploitation de ligands pseudobiospécifiques pour la purification d'enzymes de restriction

par Jérôme Champagne

Thèse de doctorat en Génie des procédés industriels

Sous la direction de Mookambeswaran A. Vijayalakshmi.

Soutenue en 2006

à Compiègne .


  • Résumé

    Des ligands pseudobiospécifiques d'ions métalliques immobilisés (IMAC), mercaptohétérocycliques et histidine immobilisée (HLAC) ont été évalués pour la séparation d'enzymes de restriction dans le cadre d'un partenariat industriel franco-indien (CEFIPRA). En étudiant l'affinité des enzymes de restriction BamHI, Sau3AI, HincIl et Hpal, nous avons proposé des protocoles alternatifs de chromatographie susceptibles de remplacer une ou plusieurs étapes dans les procédés de production. Le ligand histidine immobilisé a présenté la meilleure affinité pour les enzymes de restriction. Utilisés seul ou en combinaison avec une étape de purification préliminaire, les ligands Aminohexyl-Histidine, Bisoxirane-Histidine et Ethylènediamine-Histidine ont permis d'obtenir des enzymes de restriction actives et stables. Cette étude nous a aussi conduits à établir une base de réflexion sur l'interaction du ligand histidine immobilisée avec les enzymes de restriction au niveau des résidus du site catalytique.

  • Titre traduit

    Pseudobiospecific ligands for the purification of restriction enzymes


  • Résumé

    Pseudobiospecific ligands of immobilized metal ions (IMAC), mercaptoheterocyclic and immobilized histidine (HLAC) were used for the effective separation of restriction enzymes in the framework of a French-Indian industrial partnership (CEFIPRA). By studying the affinity of the restriction enzymes BamHI, Sau3AI, HincII and HpaJ, alternative chromatographic protocols were proposed in order to replace one or more steps in the production processes. The ligand immobilized histidine presented the best affinity for the restriction enzymes. Active and stable restriction enzymes were obtained using the ligands Aminohexyl-Histidine, Bisoxirane-Histidine and Ethylendiamine-Histidine alone or in combination with a preliminary purification step. Histidine-coupled monolithic support was also tested. This study also led us to establish a base of reflexion on the interaction of the ligand immobilized histidine with the restriction enzymes at the position of the catalytic site residues.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (140 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 215 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2006 CHA 1621
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