Méthode d’analyse des formes alcool et acétylée de l’alpha-tocophérol. Etude de leur absorption intestinale par les cellules caco-2

par Stéphane Castan

Thèse de doctorat en Biochimie. Nutrition, aspects moléculaires et cellulaires

Sous la direction de Antoine Puigserver et de El Hassan Ajandouz.

Soutenue en 2006

à Aix-Marseille 3 .

  • Titre traduit

    Method for the analysis of alpha-tocopherol and alpha-tocopheryl acetate. Intestinal absorption studies using caco-2 cells of these two forms of vitamin E


  • Résumé

    La vitamine E est un micronutriment liposoluble synthétisé par les végétaux. Son activité antioxydante lui confère de nombreux effets bénéfiques, ce qui motive sa large utilisation en alimentation animale et humaine ainsi que dans les secteurs pharmaceutique et cosmétique. Des études internes à la société Adisseo ont montré que des poulets supplémentés avec de l'acétate d'a-tocophérol (Tac) excrètent les deux tiers de celui-ci. Il s'est établi, sur cette base, une collaboration entre Adisseo et l'IMRN afin d'améliorer l'absorption intestinale de Tac, forme produite et commercialisée par la firme multinationale. Cette thèse fait partie du programme de la collaboration. Suivant l'axe de recherche défini avec le partenaire industriel, nous avons mis en place une méthode d'analyse simultanée de l'a-tocophérol (Tol) et de Tac. Ces deux formes de vitamine E sont extraites d'une matrice (solutions aqueuses, micelles mixtes, plasma, tissus. . . ) par de l'éthanol et de l'hexane, puis dosées par HPLC à l'aide d'une détection dans l'UV. La méthode est rapide, reproductible et sensible. Elle constitue, en outre, un moyen original et efficace pour mesurer l'activité estérasique sur Tac. Nos études in vitro ont montré que Tol et, à un degré moindre, Tac sont absorbés par la lignée cellulaire Caco-2. Par ailleurs, la présence d'une activité estérasique sur Tac a été mise en évidence dans les cellules Caco-2. L'optimisation des conditions de solubilisation a permis d'augmenter les quantités de vitamine E absorbées par les cellules Caco-2. Le criblage d'additifs a servi à améliorer davantage l'absorption des deux formes de vitamine E par les cellules Caco-2. Ces résultats ont été confirmés in vivo chez le porc et le poulet. Outre la contribution à la compréhension du processus d'absorption intestinale de la vitamine E, ce travail a abouti à une nouvelle formulation de vitamine E commercialisée depuis Janvier 2005 par la sodété Adisseo.


  • Résumé

    Vitamin E is a lipophylic micronutrient synthesised by plants. Various beneficial effects resulting from its antioxidant activity strongly supported its wide industrial use in feed and food, as well as its pharmaceutical and cosmetic applications. Studies by Adisseo researchers have reported that two thirds of the a-tocopheryl acetate (Tac) ingested by chickens were found to be excreted. Therefore, the aim of this collaborative work with Adisseo was to improve the bioavailability of Tac, the vitamin E form which is produced and commercialized by this multinational company. This thesis is a part of the programme of this collaboration. In line with our industrial partner, an analytical method was developed for the simultaneous determination of a-tocopherol (Tol) and Tac. These two vitamin E forms are extracted from a matrix (aqueous solutions, mixed micelles, plasma, tissues. . . ) by means of ethanol and hexane, and subsequently quantified by HPLC with UV detection. The method is fast, repeatable and sensitive. Moreover, it constitutes a new and efficient method for measuring the esterase activity on Tac. Our in vitro studies have shown that Tol and to a lesser extent Tac were both absorbed by Caco-2 cells. We have also demonstrated the presence of an esterase activity on Tac in Caco-2 cells. After optimization of the solubilization conditions, a higher level of vitamin E was found to be absorbed by Caco-2 cells. The screening of additives also allowed us to obtain an additional increase in the absorption level of both Tol and! Tac by Caco-2 cells. These results in vitro were further confirmed by in vivo studies in pig and chicken. Thus, a better insight into the understanding of vitamin E intestinal absorption process was definitely gained, and a new formulation containing vitamin E has therefore been commercialized since January 2005 by Adisseo Company.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (167-[11] f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 128-153

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université d'Aix-Marseille (Marseille. Saint-Jérôme). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 200065413
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