Mécanisme de l'électrotransfert de gènes dans les cellules animales : caractérisation des domaines d'interaction de l'ADN à la membrane et étude des conséquences intra-cellulaires

par Emilie Phez

Thèse de doctorat en Biophysique cellulaire

Sous la direction de Marie-Pierre Rols.

Soutenue en 2005

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    L'électropulsation est une méthode physique qui consiste à appliquer des impulsions électriques à des cellules afin de perméabiliser leur membrane plasmique. Cette technique est utilisée en électrochimiothérapie ou pour le transfert de gènes in vivo. Les molécules d'ADN n'entrent pas directement à l'intérieur de la cellule électropulsée mais interagissent pendant plusieurs minutes au niveau de la membrane perméabilisée face à la cathode et sous forme d'agrégats. J'ai étudié l'influence des paramètres électriques et de la composition membranaire sur cette interaction. L'augmentation du nombre d'impulsions, de l'intensité ou de la vectorialité du champ électrique entraîne une augmentation de la quantité d'ADN en interaction à la membrane. La déplétion des cellules de 40 % en cholestérol n'influe pas sur l'interaction de l'ADN à la membrane. L'ADN ne semble pas interagir à des liposomes géants électropulsés dont la membrane est constituée uniquement de phosphatidylcholines.

  • Titre traduit

    Mechanism of gene electrotransfer into animal cells : characterization of DNA/membrane interaction domains and study of intra-cellular consequences


  • Résumé

    Electropulsation is a physical method which consists in applying electric pulses to cells to permeabilize their plasma membrane. This led to the development of medical applications like electrochemotherapy, in vivo gene electrotransfer,. . . DNA molecules don't directly enter into cell cytoplasm but interact during a few minutes like aggregates only with the cell membrane facing the cathode. I studied the influence of electric field parameters and cell membrane composition on this step. An increase in electric field intensity, in pulse number or in electric field vectoriality (polarity and direction of pulses) leads to an increase in the quantity of DNA interacting with the membrane. Cell cholesterol depletion don't modify DNA/membrane interaction but seems to play a major role in intra-cellular DNA migration and/or plasmid expression. DNA molecules don't interact with electropulsed giant liposomes only made with phospatidylcholines.

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Informations

  • Détails : 1 vol. ( 226 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 152-175

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2005TOU30131
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