Anticorps anti-récepteur 5-HT4 : importance physiopathologique et caractérisation pharmacologique

par Rehab Kamel

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Johan Hoebeke.

Soutenue en 2005

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) .


  • Résumé

    Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) sont impliqués dans divers processus physiologiques. Le récepteur (R) 5-HT4 fait parti de la famille des RCPGS. L'implication des autoanticorps (autoAc) anti-R5-HT4 dans les symptômes du lupus néonatal (LN) spécialement le bloc auriculo-ventriculaire congénital (BAVc) fut démontrée par Eftekhari et coll. Ceci fut controversé par Buyon et coll. Nous avons démontré que cette divergence était due à des différences techniques. 16% des sérums de mères ayant des enfants atteints de BAVc ont montré une réactivité avec la seconde boucle extracellulaire (SBE) du R5-HT4 (peptide G21V). Malgré leur présence dans une minorité de mères ayant des enfants atteints de BAVc, les autoAc anti-R5-HT4 représentent un facteur de risque contribuant à la pathogenèse du BAVc. Pour comprendre le rôle du R5-HT4 dans le LN, nous avons produit des Ac polyclonaux de lapin dirigés contre 2 isoformes du récepteur afin d'étudier leur expression par immunofluorescence durant le développement embryonnaire de souris. Le récepteur ainsi que ses ARNm sont identifiés durant les étapes de développement précoces. Des femelles BALB/c ont été immunisées avec le G21V et accouplées. Des anomalies ont été observées chez les embryons dès le 12ème jour de gestation. Ceci suggère l'implication du R5-HT4 dans le LN quand la présence d'Ac anti-R coïncide avec l'expression du récepteur. Afin de pouvoir étudier la structure du paratope pathogène, nous avons isolé un Ac monoclonal dirigé contre le G21V. La reconnaissance du R5-HT4 par l'Ac a été démontrée par immunoempreinte et immunofluorescence. Les expériences de résonance plasmonique de surface ont démontré que l'Ac a une affinité de l'ordre du pM pour le G21V. L'Ac inhibe de façon compétitive la liaison du [3H]-GR113808 au R5-HT4. Il diminue le niveau basal de l'AMPc dans les cellules CHO exprimant le R5-HT4 et inhibe l'effet de la 5-HT. L'Ac représente un modulateur de forte affinité dirigé contre le R5-HT4.

  • Titre traduit

    Anti-5-HT4 receptor antibodies : pathophysiolgical importance and pharmacological characterisation


  • Résumé

    G protein-coupled receptors (GPCR) are involved in different physiologic processes. The 5-HT4 receptor (R) is a member of Gs PCR family. The role of anti-5-HT4 R autoantibodies (autoAb) in neonatal lupus (NL) symptoms especially the congenital heart block (CHB) has been demonstrated by Eftekhari et al. These results have been contradicted by Buyon et al. We have clarified that this discrepancy was due to technical differences in ELISA test. 16 % of mother's sera whose children have CHB showed reactivity against the second extracellular loop (SEL) of the 5-HT4 R (G21V peptide). Though 5-HT4 R autoAb are present in a minor subset of mothers whose children have CHB, they represent an additional risk factor which may contribute to the pathogenesis of disease. In order to understand the role of 5-HT4 R in NL, we have raised rabbit polyconal Ab against 2 isoforms of the receptor to study their expression during mouse embryonic development by immunofluorescence. The receptor as well as its mRNA has been identified during early development stages. BALB/c females have been immunised with G21V peptide and mated. Abnormalities have been observed among embryos starting from the 12th gestation day. These results suggest the involvement of 5-HT4 R in NL when the presence of anti-R Ab coincides with receptor expression. To study pathogenic paratope structure, we have isolated a monoclonal Ab directed against G21V peptide. The Ab recognised 5-HT4 R by immunoblotting and immunocytofluorescence. Surface plasmon resonance experiments showed that the Ab has pM affinity to G21V peptide. The Ab competitively inhibited [3H]GR113808 binding to 5-HT4 R. It showed an inverse agonist effect on the basal activity of CHO cells expressing 5-HT4 R and inhibited 5-HT effect. The Ab represents a high affinity modulator of 5-HT4 R.

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Informations

  • Détails : 171 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.149-167

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque de l'Institut universitaire de technologie Robert Schuman et de Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2005-KAMEL
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 6855
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