Etude de la structure du médiateur de la transcription de Saccharomyces cerevisiae et de la fonction des protéines Med31 (Soh1) et TFIIS dans l'initiation de la transcription

par Benjamin Guglielmi

Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Gènes, génomes, cellules

Sous la direction de Michel Werner.


  • Résumé

    Au cour de ma thèse, j’ai étudié, chez la levure Saccharomyces cerevisiae, les propriétés de deux facteurs de transcription eucaryotes. Le Médiateur (un complexe multiprotéique de 24 sous-unités chez S. Cerevisiae) est connu pour son rôle dans l’initiation de la transcription, et TFIIS est connu pour son rôle dans l’élongation de la transcription. À l’aide d’une approche double-hybride systématique, nous avons obtenu une carte des interactions au sein du complexe Médiateur. Cette carte confirme l'existence de trois modules distinct au sein du Médiateur, et identifie les domaines d'interaction entre les sous-unités. Ces interactions sont en partie conservées au sein du Médiateur de Drosophila Melanogaster suggérant une conservation de la structure et de la fonction du Médiateur de la levure aux métazoaires. Les cribles double-hybride ont montré que la protéine Med31(Soh1) interagit avec les sous-unités du Médiateur de la levure. Med31 n’avait jamais été identifié dans le Médiateur de S. Cerevisiae bien qu’elle ait été purifiée avec les complexes Médiateur métazoaires. Nous avons montré que Med31 copurifie également avec le Médiateur de levure, et que cette sous-unité est importante pour le recrutement de l'ARN polymérase II (Pol II) au promoteur d'un gène activé. L’étude plus approfondie de la fonction de cette protéine nous a conduit à proposer que le facteur d’élongation TFIIS joue un rôle nouveau dans l’initiation de la transcription. Ce rôle est indépendant de son activité de clivage des ARNm mais dépend de sa capacité à lier la Pol II. TFIIS est présent au promoteur d'un gène activé (GAL1), et pourrait être important pour le recrutement de la Pol II à ce promoteur.

  • Titre traduit

    Saccharomyces cerevisiae mediator complex structure and role of Med31 (Soh1) and TFIIS in transcription initiation


  • Résumé

    This study deals with the property of two eukaryotic transcription factors the Mediator complex and TFIIS. All experiment were carried in saccharomyces cerevisiae. Mediator is implicated in transcription initiation and TFIIS is implicated in transcription elongation. Based on a high through-put two-hybrid analysis, we produced a protein interaction map of the Mediator complex. The interaction map delineates numerous interaction domains between Mediator subunits, and confirms the organisation of Mediator in three independent modules. The interaction map is partially conserved in Drosophila Melanogaster, suggesting that Mediator structure and function are conserved from yeast to metazoans. Two-hybrid screens together with co-immunoprecipitation studies revealed that Med31 (Soh1) is associated with the yeast Mediator. We provide evidence that Med31 is required for the full recruitment of RNA polymerase II (Pol II) to an activated promoter. We show that the colethality of SOH1 deletion with the TFIIS encoding gene DST1 deletion is fully complemented by TFIIS domain II and linker and is thus independent of TFIIS Rnase activity essential for its elongation function. Moreover, a point mutation in the Pol II interacting domain II of TFIIS is sufficient for colethality with soh1-delta. Finally, we found that TFIIS interaction with Pol II is required for the full recruitment of Pol II to GAL1 promoter under activation in soh1-delta cells. We propose that Soh1 and TFIIS have redundant functions required for the efficient recruitment of Pol II at the GAL1 promoter following transcription activation.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (172 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 161-172

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(2005)43
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