Caractérisation des transposons à ADN Tc1-mariner chez le xénope et utilisation du transposon Sleeping Beauty comme vecteur de transgenèse germinale

par Ludivine Sinzelle

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de André Mazabraud.

Soutenue en 2005

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des Sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .

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  • Résumé

    Les elements de type tc1 (tles) et les éléments de type mariner appartiennent a la superfamille des transposons à adn tc1-mariner qui sont très largement répandus dans le règne vivant. Grâce aux données de ressources génomiques combinées à une stratégie de pcr dégénérée, nous avons identifié six lignées de tles présents dans le génome de l'amphibien xenopus tropicalis. La plupart de ces lignées appelées eagle, froggy, xeminos, xttxr et jumpy présente des caractéristiques typiques des éléments tles: un cadre de lecture codant une transposase de 340-350 acides aminés, encadré par des séquences répétées inversées. Pour chacune de ces lignées, nous avons identifié des copies contenant un cadre de lecture de la transposase intact suggérant que ces éléments pourraient être encore actifs. L'analyse phylogénétique montre que ces tles sont reliés à des tles d'actinopterigiens et d'amphibiens dans un deuxième temps, nous avons identifié le premier mle, xtmar1, isolé d'un génome de vertébré à sang-froid xenopus tropicalis. L'analyse phylogénétique incluant des représentants des différentes sous-familles de mles révèle que xtmar1 est relié au mle humain hsmar2, dans une deuxième lignée de la sous-famille irritans. En dernière partie, nous avons utilisé le tarnsposon tc1-mariner sleeping beauty (sb) comme vecteur de transgenèse germinale chez le xénope. Cette technique repose sur la microinjection. Dans un embryon de xénope au stade une cellule, de la transposase sb et d'un pseudo-transposon contenant le marqueur fluorescent gfp. Dans des conditions optimisées, nous obtenons un nombre important d'individus demi-transgéniques.

  • Titre traduit

    Characterization of Tc1-mariner transposons within the genome of xenopus and use of the Sleeping Beauty transposon as a genetic vector for germinal transgenesis


  • Résumé

    Mariner-like elements (mles) and tc1-like elements (tles) belong to the tc1-mariner superfamily of dna transposons which is very widespread in animals genomes we have used genomic sequencing data from the first assembly of the amphibian xenopus tropicalis genome to identify multiple lineages of tles full-length elements were isolated in each lineage and were characterized. Most of them exhibit the typical characteritics of tc1-like element these new tles were named eagle, froggy, jumpy, maya, xeminos, xttxr. Phylogeneticque study indicate that their closest relatives are present in the genomes of actinopterygian and amphibian. We have identified for most of these tles, copies containing an intact transposase open reading frame suggesting that these elements may be still active. In addition, we have identified the first complete mariner-like element, xtmar1, within the genome of a poikilotherm vertebrate, xenopus tropicalis. The phylogenetic analysis of the relationships between mle transposases reveals that xtmar1 is closely related to the human mariner hsmar2 and that togther they form a second distinct lineage of the irritans subfamily. Finally, we tested the sleeping beauty transposon system for its suitability as a genetic vector for the generation of transgenic xenopus laevis we conducted a transgenesis study based on the co-injection into one-cell stage embryos of the sb transposase rna and a gfp-reporter pseudo-transposon. The optimal conditions lead us to the obtention of half transgenic animals and a number of somatic cell clones.

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Informations

  • Détails : 161 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 141-157

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 0g ORSAY(2005)40
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