Etude du rôle de SNF5/Ini1 et des co-facteurs cellulaires dans la réplication du VIH-1

par Marlène Maroun

Thèse de doctorat en Microbiologie et virologie

Sous la direction de Richard Benarous.

Soutenue en 2005

à Paris 7 .


  • Résumé

    Catalysée par l'activité enzymatique de l'intégrase, l'intégration est une étape décisive dans la réplication du VIH-1. Afin d'élucider le mécanisme d'intégration nous avons réalisé plusieurs cribles double hybride chez la levure en utilisant l'intégrase du VIH-1 comme appât. Plusieurs protéines cellulaires interagissant avec l'intégrase ont été identifiées, parmi lesquelles SNF5/lni1 précédemment décrite et LEDGF/p75 qui est un partenaire récemment identifié. Nous avons déterminé que le core catalytique domaine de l'intégrase est nécessaire pour l'interaction avec ces deux protéines. Nous avons étudié le rôle de ces deux protéines dans la réplication virale en utilisant différentes approches. Nous avons montré que la déplétion de SNF5/lni1 par la technique d'ARN interférence ne modifiait pas la localisation nucléaire de l'intégrase. En revanche, elle entraîne une stimulation de la réplication du VIH-1. Cette stimulation est corrélée à une augmentation du nombre de copies de provirus intégré et de la quantité de cercles à deux LTR, observée par PCR quantitative. Trois mutants d'interaction ne se fixant plus à SNF5/lni1 ont été isolés par criblage double hybride d'une librairie de mutants de l'intégrase. Deux des trois mutants n'ont pas affecté l'activité catalytique de l'intégrase. La réplication des virus arborant ces mutations est augmentée par rapport au virus sauvage dans des lignées lymphocytaires. De la même façon, nous avons démontré que la perte d'interaction entre LEDGF/p75 et l'IN par mutation ponctuelle inhibe totalement la réplication du VIH-1 en empêchant l'intégration du provirus dans la chromatine.

  • Titre traduit

    Role of snf5/ini1 and other cellular co-factors in hiv-1 replication


  • Résumé

    The replication cycle of HIV-1 involves the insertion of a DNA copy of its RNA genome into a chromosome of the host cell which is catalyzed by the enzymatic activity of the viral integrase. Although this process have been intensively studied in vitro, the molecular mechanism in vivo is still poorly understood. Using yeast two hybrid screen we have isolated several cellular proteins, including SNF5/lni1, a component of the chromatin remodeling complex SWI/SNF previously described, as well LEDGF/p75 a new binding partner for HIV-1 Integrase (IN). We have shown that the catalytic core domain of the integrase is necessary for the interaction with both proteins, SNF5/lni1 and LEDGF/p75. We then investigated the role of these two cellular proteins in HIV-1 replication using different approaches. Using RNA interference we have demonstrated that thé déplétion of SNF5/lni1 does not affect the nuclear localization of the integrase, but stimulates HIV-1 replication. These results correlated with the increase of both the number of viral integrated copies and the formation of the circular 2LTR detected by quantitative PCR. Three integrase mutants deficient for the interaction with SNF5/lni1 were isolated using two hybrid screen. Two mutants have an enzymatic activity equivalent to the wild type integrase. Viruses harboring these mutants revealed increased replication in lymphocyte cell line in comparison with the wild type. Using the same approaches, we have shown that a single mutation in the integrase abolished the interaction with LEDGF/p75 inhibiting totally HIV-1 replication by preventing viral integration. Second one - inter-species - lies in comparing two genomes captured in the same state, e. Subject to the same environmental changes.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (160 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 403 réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2005) 207
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