ADN polymérase du cytomégalovirus humain : activité enzymatique et sensibilité aux entiviraux

par Alexandra Casefont-Ducancelle

Thèse de doctorat en Sciences. Microbiologie

Sous la direction de Marie-Christine Mazeron.


  • Résumé

    Le foscarnet, utilisé pour traiter les infections sévères à cytomégalovirus, est un inhibiteur de l'ADN polymérase, codé par le gène UL54. Le but du travail était d'étudier le retentissement de mutations introduites dans UL54 sur l'activité de l'enzyme et la résistance au foscarnet. Une méthode originale, reposant sur la mesure de l'incorporation de nucléotides trisphosphates marqués à la digoxigénénine dans le brin d'ADN en formation, a été mise au point pour mesurer l'activité d'ADN polymérases sauvages et mutées, et leur comportement en présence de foscarnet. L 'implication de l'extrémité N-terminale du domaine conservé delta-C dans le mode d'action du foscarnet a été démontrée pour la première fois. Le rôle d'association de mutations a été confirmé. L'étude des phénotypes de polymérases portant des mutations dans le domaine IV a permis de préciser leur rôle dans la fonction exonucléasique de l'enzyme virale


  • Résumé

    Anti-cytomegalovirus drug foscarnet, is an inhibitor of viral DNA polymerase pUL54. We aimed to analyse the impact of UL54 mutations on polymerase activity and foscarnet resistance. Mutations were introduced by mutagenesis into gene UL54 and wild-type and mutated DNA polymerases were expressed in vitro. We developed a colorimetric assay to measure DNA polymerase activity in the absence and presence of foscarnet. We demonstrated the usefulness of this DNA polymerase phenotypic assay for the characterization of mutation suspected to confer foscarnet resistance. Change N495K and combination of S291P and combination and K415R were shown to induce foscarnet resistance for the first time, confirming the wide distribution of foscarnet-resistance mutations through gene UL54. The role of N495K was confirmed by rescue marker. We assessed the major role of serine 771 on polymerase catalytic function and of amino-acids 412 and 413 on 3'5' exonuclease activity

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Informations

  • Détails : 1 Vol (152 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 134-152

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  • Bibliothèque : Université Paris Descartes-Bibliothèque médicale Necker-Enfants malades (Bibliothèque fermée pour travaux) (Paris). Service commun de la documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2005N15S/0710355674
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 6404
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