Utilisation des domaines de translocation des protéines pour l'internalisation cellulaire de la protéine Rep68 du virus adéno-associé de type 2

par Rafi Awedikian

Thèse de doctorat en Médecine. Virologie

Sous la direction de Anna Salvetti.


  • Résumé

    Les protéines Rep78/68 de l'AAV-2 (Adeno-Associated Virus type 2) sont des protéines multifonctionnelles impliquées dans sa réplication, la régulation de l'expression de ses gènes, et son intégration site-spécifique dans le génome humain. Dans le but de réguler l'activité des Rep dans les cellules, nous avons évalué l'internalisation cellulaire de la protéine Rep68 fusionnée à des domaines de translocation des protéines (PTD), tels que le PTD-TAT issu de l'HIV-1. La protéine Rep68 seule, non fusionnée à un PTD, est capable de pénétrer dans les cellules. Les protéines Rep68 et TAT-Rep68 entrent dans les cellules par la même voie d'endocytose dépendante de la clathrine et restent séquestrées dans les endosomes tardifs et les lysosomes. En présence d'adénovirus, ces protéines Rep atteignent le noyau où elles exercent leurs activités biologiques. Ces résultats sont en accord avec des études récentes montrant la translocation cellulaire des protéines TAT-fusion par la voie d'endocytose.

  • Titre traduit

    Intracellular delivery of Rep68 protein from adeno-associated virus type 2 using protein transduction domains


  • Résumé

    AAV-2 (Adeno-Associated Virus type 2) Rep78/68 proteins are multifunctional proteins required for AAV-2 DNA replication, regulation of viral gene expression, and site-specific integration into the human genome. In order to regulate Rep activity in cells, we evaluated the ability of protein transduction domains (PTD) to drive the cellular internalization of exogenously delivered PTD-fused Rep68 proteins. In particular, we focused on PTD-TAT derived from the human immunodeficiency virus 1 TAT protein. Unexpectedly, recombinant Rep68 alone, in the absence of any PTD, could enter the cells. Rep68 as the chimeric TAT-Rep68 protein were internalized through endocytosis in clathrin-coated vesicles and retained in late endosomes/lysosomes. In the presence of adenovirus, the Rep proteins could translocate into the nucleus where they displayed a biological activity. These findings support recent reports on the mechanism of entry of TAT-fused proteins and also revealed a new property of Rep68.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (173 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 146-173 f.

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  • Bibliothèque : Université de Nantes. Service commun de la documentation. BU Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 05 NANT 04-VS
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 6554
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