Les "Locked Nucleic Acids" pour la stratégie anti-gène : de la fixation sur l'ADN aux applications fonctionnelles

par Erika Brunet

Thèse de doctorat en Sciences de la vie

Sous la direction de Carine Giovannangeli.

Le président du jury était Thérèse Garestier-Hélène.

Le jury était composé de Jean-Jacques Toulmé, Didier Gasparutto.

Les rapporteurs étaient Annick Harel-Bellan, Bernard Lopez.


  • Résumé

    Nous avons caractérisé des oligonucléotides capables de former une triple-hélice (OFT) chimiquement modifiés sous forme de Locked Nucleic Acids (LNA), les OFT/LNA : 1/ Propriétés anti-gènes: Les OFT/LNA sont capables de former in vitro des complexes très stables et sélectifs de la séquence d’ADN cible. Cette stabilité thermodynamique permet la formation intracellulaire d’un triplexe stable. 2/ Fixation dans la chromatine Nous avons montré que la fixation des OFT/LNA est spécifique de la séquence ciblée (jusqu’à 50% de fixation) et que son efficacité est corrélée à l’accessibilité de la chromatine, l’OFT/LNA se fixant mieux sur les régions décompactées. 3/ Induction de coupures double-brin ciblées Ces ligands de l’AD (OFT/LNA) ont été couplés à un agent de coupure, la phénanthroline (OP) pour obtenir des coupures double-brin de façon spécifique dans les cellules. Le taux de modification spécifique est de 50% sur cible épisomale. La coupure endogène est en cours de caractérisation.


  • Résumé

    We have studied triplex-forming oligonucleotides (TFO), chemically modified as Locked Nucleic Acids (LNA), the TFO/LNA: 1/ Anti-gene properties TFO/LNA are able to form highly stable and specific complexes on the DNA target sequence in vitro. This thermodynamic stability leads to stable triplex formation in cells. 2/ Binding in the chromatine structure We have characterized TFO/LNA binding in chromatin and evaluated the cellular factors driving binding efficiency. We have shown that about 50% of the chromosomal target can be covered by the TFO specifically, and that the efficiency of TFO binding in chromatin was correlated to chromatin accessibility: TFO did bind more efficiently to unfolded chromatin regions. 3/ Induction of targeted DNA damages We have studied TFO covalently linked to a cleaving agent, the phenanthroline (OP). In cells, DNA modifications occur specifically at 50% of the episomal target plasmid. We are presently running experiments on chromosomally located target sites.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (179 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 161-179

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Muséum national d'histoire naturelle. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 2005 -- 33
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2016-000192
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