Convoyage et transfert du cuivre(I) à l'appareil de Golgi dans saccharomyces cerevisiae : rôle de la métallo-chaperonne Atx1 et de l'ATPase Ccc2

par Isabelle Morin

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Elisabeth Mintz.

Soutenue en 2005

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'objectif de cette thèse réside dans l'étude du convoyage du cu(I) à l'intérieur de l'appareil de golgi dans la levure saccharomyces cerevisiae. La métallo-chaperonne ATX1 séquestre le cu(I) cytosolique puis le transfère à l'extremité N-terminale de l'atpase CCC2, localisée dans les membranes du golgi. Ce domaine N- terminal est constitué de deux domaines de liaison aux métaux lourds, dénommés M1 et M2, qui sont homologues à ATX1. Des tests de complémentation dans une souche ATX1 ont montré que des protéines analogues à ATX1, de par un repliement βαββαβ et la présence d'un motif de liaison aux métaux lourds CXXC (M1 et M2 produit en protéines solubles par exemple) pouvaient se substituer à ATX1. Afin d'améliorer la sensibilité du test phénotypique, un nouveau vecteur d'expression a été créé qui permet l'expression de CCC2 en infime quantité. En utilisant ce nouveau système d'expression, des tests de complémentation ont été réalisés dans une soucheATX1 CCC2. La co-expression d'ATX1 (ou d'un homologue) avec des protéines CCC2 modifiées sur leur extrémité n- terminale a permis de caractériser in vivo le mécanisme de transfert du cu(I) entre les deux protéines partenaires. Ainsi, ATX1 et certains homologues délivrent le cu(I) indifféremment à M1 ou à M2 de CCC2. Néanmoins, les homologues sont moins efficaces qu' ATX1. Cette différence de fonctionnalité semble dépendre de la flexibilite de la boucle de liaison au métal des homologues, ainsi que de leurs surfaces de potentiel électrostatique. Le cuivre lié sur l'extrémité N-terminale de l'atpase est ensuite transféré à un site de liaison qui reste à définir, localisé potentiellement sur la grande boucle cytoplasmique.


  • Pas de résumé disponible.

  • Titre traduit

    Inquiry into copper delivery to the secretory pathway in yeast role of the metallo-chaperonne ATX1 and the copperaipase CCC2


  • Résumé

    The main goal of my phd is to investigate in yeast how copper is transferred from the cytosolic metallochaperone atxi to CCC2, the atpase embedded in the golgi membranes that is responsible for copper delivery to the secretory pathway. An interaction w as previously shown between ATX1 and CCC2 N-terminus which encloses two ATX1-like domains, denoted M1 and M2. To study copper trans fer, complementation assays were performed in an ATX1 yeast strain : several structural homologues (such as M1 and M2 produced as soluble proteins) could replace aixi in delivering copper to CCC2. To increase the sensitivity of these phenotypic tests, a yeast expression vector w as engineered to produce harol y detect able amounts of CCC2. Using this new system of expression, we co-expressed, in an ATX1 CCC2 yeast strain, ATX1 (or an homologue) and a modified CCC2 bearing a mutated or truncated N-terminus. Such complementation assays were analyzed to assess copper transfer to either M1 or M2 tethered to CCC2. ATX1 and some homologues trans fer copper either to M1 or to M2 tethered to CCC2. Complementation was less efficient with homologues than with ATX1, enhancing the special properties of ATX1. Once on the N-terminus, copper is thought to be delivered to another copper binding site of the protein, potentiall y localised on the large cytosolic loop of CCC2.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (138 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p. 125-138

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TS05/GRE1/0207
  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS05/GRE1/0207/D
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