Etude de la composition et de l'assemblage du pore de translocation du système de sécrétion de type III chez Pseudomonas aeruginosa

par Julien Gouré

Thèse de doctorat en Virologie, microbiologie, immunologie

Sous la direction de Ina Attree-Delic.

Soutenue en 2005

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Pseudomonas aeruginosa est un pathogene opportuniste responsable d'infections graves chez les individus immunodeprimes et chez les personnes atteintes de mucoviscidose. Comme de nombreuses bacteries a gram negatif, p. Aeruginosa possede un systeme de secretion de type iii (sstt). Ce sstt permet a la bacterie d'injecter des effecteurs cytotoxiques directement dans le cytoplasme des cellules eucaryotes cibles. Chez p. Aeruginosa, il est compose de l'appareil de secretion psc (pop secretion) ancre dans la paroi bacterienne et d'un translocon code par l'operon pcrgvhpopbd, qui permet l'injection des effecteurs dans le cytosol de la cellule eucaryote. Nous avons montre dans le laboratoire que l'isolat clinique cha de p. Aeruginosa est capable d'induire une mort rapide par oncose des phagocytes. L'utilisation des hematies comme modele cellulaire m'a permis de montrer que cette oncose est associee a la formation de pores, de taille estimee entre 28 et 35 a, dans la membrane cytoplasmique de ces cellules. Des experiences de mutagenese montrent que la formation de ces pores requiert les proteines pcrv, popb et popd. En parallele, nous observons que les souches de p. Aeruginosa deficientes pour chacune de ces proteines sont incapables de transloquer les effecteurs cytotoxiques, exos et exot, dans le cytoplasme de fibroblastes 3t3/gfa. De plus, des experiences de fractionnement de membranes d'hematies infectees par differentes souches de p. Aeruginosa indiquent que les proteines popb et popd constituent le pore de translocation insere dans la membrane eucaryote alors que la proteine pcrv agirait comme une chaperonne extracellulaire de ces deux proteines transloca trices.


  • Pas de résumé disponible.

  • Titre traduit

    Study of the pseudomonas aeruginosa type III secretion system translocon composition and assembly


  • Résumé

    PSEUDOMONAS AERUGINOSA IS AN OPPORTUNISTIC PATHOGEN FOR HUMANS AND IS ONE OF THE MAJOR AGENTS RESPONSIBLE FOR NOSOCOMIAL INFECTIONS. P. AERUGINOSA, LlKE OTHER GRAM-NEGATIVE PLANT AND ANOMAL PATHOGENS, UTILIZES A TYPE III SECRETION-TRANSLOCATION SYSTEM (TTSS) TO INTOXICATE EUKARYOTIC CELLS. THIS SYSTEM ALLOWS TO THE EXTRACELLULARL Y LOCATED BACTERIUM TO INJECT ITS TOXIC PRODUCTS (EFFECTORS) DIRECTL Y INTO THE HOST CELL CYTOPLASM. THE SECRETION AND TRANSLOCATION STEPS INVOLVE MORE THAN 20 PROTEINS ASSEMBLED INTO A NEEDLE-LiKE STRUCTURE CALLED INJECTISOMES. COMPONENTS INVOLVED lN EFFECTOR TRANSLOCATION ACROSS THE HOST PLASMA MEMBRANE ARE ENCODED lN THE pcrGVH-popBD OPERON. LN THE LABORATORY, WE HAVE SHOWN THAT THE P. AERUGINOSA CYSTIC FIBROSIS ISOLATE CHA INDUCES TYPE III SECRETION SYSTEM-DEPENDENT ONCOSIS OF PHAGOCYTES. THIS CELLULAR ONCOSIS IS PRECEDED BY THE FORMATION OF PORES INSERTED INTO EUKARYOTICS MEMBRANES. INTERACTION OF P. AERUGINOSA WITH RED BLOOD CELLS (RBC) SHOWED THAT THIS PORES WERE ESTIMATED FROM OSMOPROTECTION EXPERIMENTS TO BE BETWEEN 28 AND 35A. LN PARALLEL, WE FOUND THAT THERE WAS A SIMUL TANEOUS REQUIREMENT FOR ALL THREE PROTEINS, PCRV, POPB, AND POPD, FOR CELL INTOXICATION AND HEMOL YSIS. FRACTIONATION EXPERIMENTS WITH INFECTED RBCs SHOWN THAT ONL Y POPB AND POPD FORM THE MEMBRANE-ASSOCIATED CORE OF THE PORE. WE DEMONSTRATED THAT THE ANTI-V ANTIBODIES THROUGH THEIR DIRECT INTERACTION WITH V PROTEINS, INHIBITS BACTERIA-INDUCED HEMOL YSIS, AS lN PCRV MUTANT, BY ACTING AT THE LEVEL OF TYPE III TRANSLOCON ASSEMBL Y lN HOST CELL MEMBRANES. THESE RESUL TS SUGGESTS THAT PCRV PROTECTIVE ANTIGEN WOULD ACT AS EXTRABACTERIAL CHAPERONES.

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Informations

  • Détails : 180 p.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.149-174

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : TS05/GRE1/0020
  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS05/GRE1/0020/D
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