Développement d'enzymes recombinants issus des bactéries marines P. Carrageenovora et SW5 pour la production d'oligo-fucoïdanes et d'oligo-ë-carraghenane

par Sébastien Colin

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Bernard Kloareg.

Soutenue en 2005

à Compiègne .


  • Résumé

    Ce travail visait à caractériser et produire deux enzymes originaux hydrolysant d'une part un polysaccharide pariétal d'algue rouge (le γ-carraghénane), et d'autre part un polysaccharide d'algue brune (le fucoïdane). Ces deux endo-hydrolases extracellulaires sont produites par deux bactéries marines saprophytes, P. Carrageenovora, et SW5. Suite à la purification des deux enzymes sauvages, leur[s] gène[s] ont été clonés puis séquencés. L'activité recombinante obtenue par surexpression dans E. Coli a validé les séquences obtenues. L'analyse de ces dernières montre l'architecture modulaire des deux protéines. Cependant, le domaine catalytique de la γ-carraghénase n'a pas pu être identifié. Il s'agit donc d'un membre orphelin des glycoside hydrolases, distinct des carraghénases préalablement caractérisées. A l'inverse, les similitudes partagées par la séquence de la fucoïdanase avec deux autres fucoïdanases, a permis de définir une nouvelle famille de glycoside hydrolases.

  • Titre traduit

    Development of recombinant enzymes from the marine bacteria P. Carrageenovora and SW5 to allow production of oligo fucoifans and oligo carrageenans


  • Résumé

    This work aimed to characterize and produce two new biocatalysts which hydrolyze two polysaccharides extracted from the cell wall of red algae (γ-carrageenan) and brown algae (fucoidan). These extracellular endo-hydrolases are produced by two saprophytic marine bacteria, Pseudoalteromonas carrageenovora, (y-Proteobacteria), and SW5 (Bacteroidetes). Following the purification ofwild-type proteins, their genes were cloned and sequenced. The recombinant activity obtained by overexpression in E. Coli confirmed that the cloned sequences coded for corresponding enzymes. Sequence analysis showed that the enzymes have a modular structure. The catalytic domain of the γ-carrageenase was net identified. This enzyme is therefore different from previously described glycoside hydrolases, and aise distinct from previously known carrageenases. The fucoidanase sequence shares similarity with two other bacterial putative fucoïdanase and these three enzymes define a new glycosidase family.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (351 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 249 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2005 COL 1558
  • Bibliothèque : Station biologique. Service de documentation scientifique.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : M-130220060001
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