Etude du rôle de la GPIbβ dans la thrombopoïèse et les fonctions plaquettaires

par Catherine Strassel

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de François Lanza.

Soutenue en 2004

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) .


  • Résumé

    L'hémostase est un processus physiologique intervenant dans le maintien de l'intégrité des vaisseaux. Un dérèglement de ce mécanisme favorise les accidents thrombotiques ou entraîne des problèmes hémorragiques graves. L'hémostase primaire fait intervenir les plaquettes et permet l'arrêt des saignements dans les vaisseaux de petits calibres suite à une lésion. En présence de flux sanguins élevés (artères, microvaisseaux), l'adhésion est principalement assurée par le complexe glycoprotéique GPIb-V-IX, récepteur du facteur de Willebrand. L'importance de ce récepteur est attestée par l'existence d'un syndrome hémorragique grave, le syndrome de Bernard-Soulier, provoqué par l'absence ou l'anomalie d'une des sous-unités du complexe, caractérisé par un temps de saignement allongé, une thrombopénie et des plaquettes de grande taille. L'objectif de ce travail de thèse a été d'évaluer in vivo et in vitro le rôle de la GPIbβ, membre du complexe GPIb-V-IX, dans les fonctions plaquettaires et la thrombopoïèse. Deux lignées de souris transgéniques ont été produites par recombinaison homologue : une lignée de souris knock-out où le gène codant pour la GPIbβ a été invalidé et une lignée de souris knock-in où la GPIbβ a été délétée de son domaine intracellulaire. Ces modèles de souris reproduisent un phénotype de type Bernard-Soulier et nous permettront d'étudier plus précisément le rôle de la GPIbβ et de son domaine intracellulaire dans les fonctions plaquettaires et dans les mécanismes de libération des plaquettes. Un autre aspect du travail a été d'évaluer, in vitro, la fonction de la GPIbβ. Trois mutations, retrouvées chez des patients, ont été reproduites par transfection dans des lignées de cellules d'ovaire de hamster (CHO). Ces études nous ont permis démontrer le rôle clé de la GPIbβ dans la biosynthèse du complexe GPIb-IX et de préciser les domaines structuraux essentiels à l'expression de ce dernier.

  • Titre traduit

    Study of the GPIbβ subunit in thrombopoiesis and in platelet function


  • Résumé

    The glycoprotein (GP) Ib-V-IX complex is a specialized multisubunit receptor abundantly expressed at the surface of platelets and whose physiological role is to ensure normal haemostasis. This property is best illustrated by the existence of a severe bleeding tendency in patients with the rare Bernard-Soulier syndrome resulting from a genetic defect of the GPIb-V-IX complex. Increased bleeding is mainly due to the lack of platelet adhesion to VWF mediated by the complex, resulting in defective platelet plug formation at sites of vessel wall injury. These patients additionally have platelets with enlarged size and decreased numbers in the circulation. The purpose of this work was to evaluate the role, in vivo and in vitro, of the GPIb-V-IX complex, and more particularly the role of GPIb within this complex, in platelet function and in platelet production. For this study, two genetically modified mouse models were engineered. A Bernard-Soulier-like knock-out strain was generated by inactivating the GPIbβ gene (GPIbβ KO) and a knock-in strain was created by interrupting the sequence coding for the GPIbβ intracellular domain (GPIbβC). The GPIbβKO mice exhibited the Bernard-Soulier phenotype, which is thrombocytopenia, giant platelets and a severely prolonged bleeding time. The further perspectives of this work will be to evaluate the function of GPIbβ in haemostatic function and in artertial thrombosis. Another aspect of this work was to evaluate, in vitro, the function of the GPIbβ subunit by transfecting mutated GPIb-IX complex into CHO cells. Three mutations from patients were reproduced and analysed. This study underlined the key role of the GPIbβ in the biosynthesis process and precised the structural domains essential for the complex expression. Overall, these results have provided direct evidence for the involvement of the GPIbβ in platelet function and the transgenic mice will proved useful to directly evaluate the role of this subunit in in vivo thrombosis.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (181 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 167-181

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.2004;4563
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