Optimisation de l'expression du polyépitope [L4T4]2 de l'hémagglutinine du virus de la rougeole dans le tabac et étude de ses propriétés immunogènes

par Haude Jeanpierre

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de André Steinmetz.

Soutenue en 2004

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) .


  • Résumé

    La vaccination systématique contre la rougeole a réduit de façon significative l'incidence de cette maladie infantile dans le monde entier. Cependant, principalement dans les pays en voie de développement, elle continue a tuer près de 800 000 enfants chaque année. Le développement de systèmes économiques de production de protéines immunogènes est essentielle dans l'éradication du virus, prévue pour 2015 par l'OMS. Ces systèmes devront concilier a la fois une forte efficacité de production des protéines sous forme native, mais aussi permettre de diminuer leurs coûts de production et d'extraction. Des travaux précédents ont montré qu'il était possible de produire l'hémagglutinine (protéine H), et des protéines chimériques qui en dérivent dans des plantes transgéniques. Une augmentation significative la production du polyépitope [L4T4]2 par agro-infiltration de feuilles de tabac nicotiana benthamiana, a été obtenue en utilisant la séquence signal SF2. Cette séquence permet la translocation des protéines dans le reticulum endoplasmique puis leur libération dans le lumen. Des analyses ELISA ont révèlé la présence du polyépitope dans sa conformation fonctionnelle. Des observations en microscopie électronique ont montré l'induction de structures sphériques par la séquence signal SF2, dans les quelles sont piégées les protéines. Cependant, la présence de cette séquence inhibe la régénération de plantes transgéniques. A la suite d'injections intrapéritonales nous avons montré que le polyépitope [L4T4]2 produit dans des plantes pouvait induire la mise en place d'une réponse immunitaire spécifique dirigée contre le virus de la rougeole, chez la souris.

  • Titre traduit

    Optimisation of the [L4T4]2 mealsles virus hemagglutinin protein polyepitope expression in tobaco and study of its immunogenic properties


  • Résumé

    Systemic vaccination against measles has significantly reduced the impact of this childhood disease all over the world. However, 800 000 children still die from measles in developing countries each year. The development of economic production methods for immunogenic proteins is an essential step in the eradication of the virus, as planned by the WHO for 2015. These methods should present a high native protein production efficiency, and also allow reduction of production and extraction costs. Precedent research works showed the possibility to produce both the hemagglutinin (H protein), and chimeric protein derived fron the HA in transgenic plants. Using agro-infiltration of Nicotiana benthamiana leaves, a significant increase in production of the [L4T4]2 polyepitope has been observed after fusion of the SF2 signal sequence. This signal sequence induces the protein translocation into the endoplasmic reticulum, and eventually its release into the lumen after signal sequence cleavage. ELISA analyses showed the protein was produced in its native conformation. Observation by electronic microscopy showed induction of spheric structures in which the [L4T4]2 polyepitope was stored. However, the presence of SF2 signal sequence inhibited the transgenic plant regeneration. Intraperitoneal injection of [L4T4]2 that had been produced in plants cells induced a measles specific immune response.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (155 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 122-133

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.2004;4746
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