Rôle de la voie ERK et du facteur de transcripion HMGA2 dans la différenciation des cellules souches embryonnaires de souris : établissement du système d'expression inductible Lacl-IPTG dans ces cellules

par Leslie Caron

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Bernard Binetruy.

Soutenue en 2004

à Nice .


  • Résumé

    Nous avons étudié le rôle du facteur de transcription HMGA2, dans la différenciation ces cellules souches embryonnaires de souris (ES). Des cellules ES surexprimant la forme tronquée (HMGA2/T) ou entière (HMGA2wt) de HMGA2 ont été établies et analysées pour leur capacité à se différencier dans divers lignages. Contrairement aux cellules sauvages ou surexprimant HMGA2wt, les cellules ES HMGA2/T développent des myotubes contractiles. Les tératocarcinomes induits par les cellules ES HMGA2/T forment de larges zones de tissu musculaire squelettique, jamais observées dans les tumeurs issues des cellules contrôles. En revanche, la surexpression de HMGA2 n'affecte pas l'engagement des cellules ES dans les autres lignages. Ces résultats montrent un nouveau rôle de HMGA2 dans la différenciation du muscle squelettique. La seconde partie concerne l'établissement du système d'expression inductible LacI/IPTG dans les cellules ES. En absence d'inducteur, le répresseur LacI réprime la transcription du gène d'intérêt en se fixant sur des séquences opératrices. La répression est levée par l'IPTG. Deux séquences opératrices ont été insérées au sein du promoteur de la b-actine et permettent une régulation efficace du transgène, dans les cellules ES exprimant LacI. Des cellules ES exprimant la GFP sous contrôle du promoteur inductible ont été établies. L'induction de la GFP par l'IPTG est maintenue tout au long du processus de différenciation et a pu être observée dans les cardiomyocytes et les neurones dérivés des cellules ES. Ce système d'expression inductible pourra maintenant être utilisé pour déterminer précisément le rôle du facteur de transcription HMGA2 dans la différenciation.

  • Titre traduit

    Role of the ERK MARK pathway and the HMGA2 transcription factor during mouse embryonic stern cells (ES cells) differentiation : establishment of the Lact-IPTG inductible expression system in ES cells


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    We investigated the role of the HMGA2 transcription factor during mouse embryonic stem cells differentiation (ES cells). ES cells overexpressing either wild-type (HMGA2wt) or truncated (HMGA2/T) form of HMGA2 were analysed for their capacities to differentiate into a variety of lineage. Following differentiation, as opposed to control cells and HMGA2wt ES cells, overexpressing HMGA2/T ES cells massively formed contractile myotubes and highly expressed the muscle Myosin Heavy Chain marker. Interestingly, in experimental conditions inhibitory for myogenesis, we observed a strong expression of MyoD and myogenin in HMGA2/T cells. By contrast, commitment into adipocyte, neuron and cadiomyocyte lineages was not affected. Finally, teratocarcinomas induced by HMGA2/T ES cell lines presented numerous skeletal muscle-differentiated tissues that were not observed in wt HMGA2 or control tumors. Our results reveal a novel function of the oncogenic form of HMGA2 in skeletal muscle differentiation. Control of mammalian gene promoters by the bacterial LacI repressor provides inducible regulation and dose-response levels of expression by the lactose analog IPTG. We show that insertion of LacI binding sites in the b-actin promoter confers an efficient IPTG-regulatable expression of reporter genes in ES cells expressing LacI. We established ES cell lines stably expressing GFP under inducible control and found that this regulatable expression was maintained throughout the differentiation process. Importantly, GFP induction by IPTG was observed in individual well-differentiated cardiomyocytes and neurons. This inducible system will be used to study HMGA2 during ES cells differentiation.

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Informations

  • Détails : 113 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 90-113. Résumé en français

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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 04NICE4068
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