Purification et caractérisation de la sélénoprotéine P humaine : étude préliminaire de ses propriétés anti-oxydantes

par Mohamed Salah Gallah

Thèse de doctorat en Méthodes de recherche sur l'environnement et la santé

Sous la direction de Anne-Marie Roussel.

Soutenue en 2004

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) .


  • Résumé

    La sélénoprotéine-P (Se-P) est une glycoprotéine plasmatique qui comporte dix atomes de sélénium. Elle transporte ainsi plus de la moitié du sélénium plasmatique chez l'homme mais sa fonction demeure mal connue. Afin d'étudier l'activité de protection de la Se-P contre l'anion peroxynitrite et mettre au point une méthode de dosage immunologique de cette protéine, nous l'avons purifiée à partir du plasma humain par l'association de deux étapes chromatographiques. Nous avons obtenu un facteur de purification de 1300 et un rendement de 32% pour cette protéine. Les analyses réalisées en gels de polyacrylamides, en western-blot et par spectrométrie de masse MALDI-TOF ont révélé que la Se-P est caractérisée par deux isoformes de poids moléculaires 57 et 61 kDa. La recherche d'une activité anti-oxydante de la Se-P purifiée a montré que les astrocytes de rat en culture primaire sont partiellement protégés des cassures d'ADN induites par les ions peroxynitrite en présence de cette protéine.


  • Résumé

    Selenoprotein-P (Se-P) is an extracellular glycoprotein which contains 10 selenocysteine residues. It accounts for more than half of the selenium content in human plasma, but its function is currently unknown. In order to study the protective activity of Se-P against peroxynitrite and to finalize an immunological assay for the quantification of this protein, Se-P was purified from humain plasma using the association of two chromatographic steps. Our results showed that the purification achieves a 1300-fold enrichment with a 32% yield of Se-P. Two distinct isoforms were isolated and identified by SDS-PAGE, immunoblot and MALDI-TOF mass spectrometry. Their molecular masses were 61 and 57 kDa. The antioxidant effect of purified Se-P was studied with rats astrocytes in primary culture stressed with peroxynitrite and assessed using the comet assay. Preliminary data demonstrated that selenoprotein P decreased the strand breaks of DNA.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (137 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 120-137

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin-d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire Médecine Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TP04/8009
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 6171
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